KATP在大鼠中的表达及麻黄对平滑肌细胞增殖的研究

论文摘要

本论文优化、比较了分离肺动脉平滑肌细胞和支气管平滑肌细胞的两种方法:植块培养法和酶消化法。结果表明,分离肺动脉平滑肌细胞用酶消化法较好。分离、剪碎的肺动脉平滑肌用0.2%的Collagenase I 37℃恒温消化1hr 左右后,再用0.05%的Trypsin 室温消化510 分钟,辅以吹打,终止消化得到大量带状或纺锤状、细胞膜光滑、胞质均匀的平滑肌细胞。分离的支气管平滑肌剪碎成1mm3的小块采用植块培养的方法较好,1 周后有细胞从边缘爬出,大约34 周后铺满培养皿,所得细胞呈梭形,纯度较高。用含10%FBS 的DMEM 培养基进行传代培养。KATP 通道Kir 亚基有Kir6.1 和Kir6.2 两种类型,SUR 亚基有SUR1、SUR2A 和SUR2B 三种类型。本论文应用RT-PCR 技术,从原代培养的Wistar 大鼠肺动脉平滑肌细胞及支气管平滑肌细胞第3-5 代提取总RNA,逆转录,针对Kir6.1、Kir6.2、SUR1、SUR2A 和SUR2B 的特异性片段进行PCR 扩增鉴定,发现肺动脉平滑肌细胞有Kir6.1,SUR1和SUR2B的表达,其中SUR1表达量较弱; 支气管平滑肌细胞有Kir6.1和SUR2B的表达。我们进一步针对Kir6.1 和SUR2B 用肺动脉平滑肌细胞和支气管平滑肌细胞总RNA 进行了RT-PCR 扩增,都获得了预期大小的PCR 产物。麻黄是治疗呼吸系统疾病和心血管疾病的重要中药。研究表明,其主要成分盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱300μg/ml 作用48hrs 后对肺动脉平滑肌细胞增殖抑制率达到39.6%和42.7%; 前者作用72hrs 后对支气管平滑肌细胞增殖抑制率为7.2%,而后者则基本没有影响。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 绪论
• ATP 通道的分子结构'>1.1 K_ATP通道的分子结构
• ATP 通道亚基的组织特异性'>1.2 K_ATP通道亚基的组织特异性
• 1.3 平滑肌细胞KATP 通道的生理作用
• 1.4 盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱
• 1.5 本课题主要研究内容
• 2 细胞的获取与培养
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验方法
• 2.3 结果与讨论
• ATP 通道亚基的PCR 鉴定'>3 K_ATP 通道亚基的PCR 鉴定
• 3.1 实验材料
• 3.2 实验方法
• 3.3 实验结果与讨论
• 4 盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱对ASMC 和BSMC 增殖的影响
• 4.1 材料与方法
• 4.2 结果与分析
• 5 总结与展望
• 致谢
• 参考文献
• 附录1 攻读硕士学位期间发表的论文目录