论文摘要
目的:以体外培养的大鼠泪腺上皮细胞为模型,自制糖基化终末产物（AGEs）,观察AGEs对大鼠泪腺上皮细胞氧化应激及NF-κB活性的影响。方法:1.采用酶消化法培养原代大鼠泪腺上皮细胞。2.糖孵育法制备牛血清白蛋白的AGEs。3.以不同浓度的AGEs（12.5、25、50、100、200μg/ml）与泪腺上皮细胞作用48小时,再选取敏感浓度组100μg/ml AGEs分别作用泪腺上皮细胞12、24、48小时,用分光光度法测量细胞内丙二醛含量（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）活力,western blot法检测胞核NF-κB p65蛋白的表达。结果:1.所培养的第2代大鼠泪腺上皮细胞纯度可达85%以上。2.荧光分光光度法鉴定AGEs-BSA的荧光值:PBS调零,激发波长390nm,发射波长450nm,峰狭5nm。3.AGEs以浓度和时间依赖性增加泪腺上皮细胞内丙二醛含量,同时降低超氧化物歧化酶活力及增加胞核NF-κB p65蛋白的表达（P<0.01）。结论:1.酶消化法成功的分离和培养大鼠泪腺上皮细胞。2. AGEs促进泪腺上皮细胞NF-κB p65蛋白的表达,在一定范围内呈剂量时间依赖性,其机制可能与AGEs通过RAGE增加细胞内氧自由基的产生使细胞处于氧化应激状态有关。推测AGEs在体内可能诱发或加重泪腺炎症而引起糖尿病和年龄相关的泪腺病理改变。
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