论文摘要
目的Tumstatin是胶原蛋白Ⅳ胶原a3链的C端包括非胶原区在内约28KD大小的一个片断,体外试验和动物模型已经发现Tumstatin对包括黑色素瘤、神经胶质瘤、前列腺癌、喉鳞癌等在内的多种肿瘤均有抑制作用,有望成为极具潜力的新型抗肿瘤药物。目前Tumstatin与肺癌的相关报道比较少见,Tumstatin对PI3K/Akt及MAPK/ERK信号通路的影响尚未完全明了,Tumstatin是否与常用化疗药物存在协同作用亦有待研究。本项目以体外培养的肺腺癌细胞株A549及耐顺铂的肺腺癌耐药细胞株A549/DDP为研究对象,观察Tumstatin185-191（Tum185-191）单药、顺铂单药及两药联合应用时对肺腺癌细胞增生与凋亡的影响,并检测干预前后细胞中Akt与ERK的活性变化,以探讨Tumstatin对肺腺癌细胞的作用及其可能作用机制。方法MTT法测定Tum185-191、顺铂单药及两药联合干预48小时后对A549及A549/DDP细胞增殖的影响,并计算其不同药物干预下的IC50、耐药指数和逆转指数;Hoechest 33258 DNA染色及流式检测分析Tum185-191及顺铂对肺癌细胞凋亡的影响;细胞免疫组织化学及Western blot检测Tum185-191及顺铂对p-Akt、p-ERK蛋白表达的影响。结果Tum185-191对A549及A549/DDP细胞的增殖均有抑制作用,其IC50分别为73.67μM、80.25μM;顺铂对A549细胞的IC50为5.24μM,当其与20μM或40μM的Tum185-191联合应用时,顺铂对A549细胞的IC50分别下降为3.48μM、1.39μM;A549/DDP细胞相对于A549细胞对顺铂的耐药指数为14.73;顺铂对A549/DDP细胞的IC50为77.16μM;当顺铂与20μM的Tum185-191联合应用时,顺铂对A549/DDP细胞的IC50下降为57.97μM,耐药逆转指数为1.33;当顺铂与40μM的Tum185-191联合时,顺铂对A549/DDP细胞的IC50为26.40μM,耐药逆转指数为2.92。联合应用Tum185-191及顺铂对A549、A549/DDP细胞凋亡的诱导作用均较单药应用时显著增加。细胞免疫组织化学及Western blot检测发现p-Akt、p-ERK在未经干预的A549及A549/DDP细胞内均呈高表达状态,Tum185-191能显著抑制p-Akt、p-ERK的表达,顺铂对p-Akt、p-ERK的表达无明显影响,Tum185-191与顺铂联合使用并不增加Tum185-191对p-ERK、p-Akt的抑制效应。结论Tum185-191单药或联合顺铂对于A549、A549/DDP细胞均有显著抑制作用。Tum185-191能够增加A549细胞对顺铂的敏感性并部分逆转A549/DDP细胞对顺铂的化疗耐药。Tum185-191可能通过下调A549及A549/DDP细胞内p-Akt、p-ERK水平发挥其抑制细胞生长、促进细胞凋亡的作用。Tum185-191增加细胞对顺铂的敏感性、部分逆转肺腺癌的化疗耐药可能与其对Akt、ERK活性的抑制作用有关。
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