论文摘要
目的:通过检测Survivin、VEGF-C、CyclinD1、CDC25A和PCNA在胆管癌中的表达,探讨其在胆管癌发生发展中的作用及其机制,为胆管癌诊断和治疗寻找新的靶点。方法1实验标本采取胆管癌组织、相同个体癌旁胆管组织及其正常胆管组织1.1采用免疫组化过氧化物酶标记链霉卵白素法（SP）对42例胆管癌组织及20例正常组织中Survivin、VEGF-C及PCNA蛋白进行检测并结合患者的年龄、性别以及肿瘤大小、部位、分化程度、淋巴结转移等临床病理因素进行综合分析。所取的标本均通过病理学诊断证实。1.2采用流式细胞术检测42例胆管癌和20例正常胆管组织的CyclinD1、CDC25A蛋白的表达,其中蛋白的表达量用平均荧光强度（均道值）来表示。所取的标本均通过病理学诊断证实1.3采用RT-PCR方法检测42例术中所取的新鲜的胆管癌组织、17例同个体癌旁胆管组织和20例正常胆管组织中Survivin、VEGF-C、CyclinD1、CDC25A及PCNA的mRNA表达,术中所取的标本均通过病理学诊断证实。经Gel-proanalyzer3.1软件分析RT-PCR产物的光密度（optical density,OD）,计算Survivin、VEGF-C、CyclinD1、CDC25A及PCNA的OD值与内参照基因（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GADPH）OD值的比值,作为目的基因产物mRNA的相对含量。2应用The SAS System for Windows v6.12软件进行统计学处理。实验数据以均数±标准差（x±s）表示,不同组别实验数据比较采用方差分析（ANOVA）,进一步两两比较采用t检验（LSD法）;免疫组化结果采用卡方检验;均以α=0.05为检验水准,当P<0.05时具有统计学意义。结果1.用免疫组化检测42例胆管癌组织及其20例正常胆管组织Survivin、VEGF-C及PCNA的蛋白的表达情况胆管癌组织、正常胆管组织中Survivin表达的阳性率分别为78.57%和25.00%,胆管癌组织的阳性率明显高于正常组织;胆管癌组织、正常胆管组织中VEGF-C表达的阳性率分别为83.33%和30.00%,胆管癌组织的阳性率明显高于正常组织;胆管癌组织、正常胆管组织中PCNA表达的阳性率分别为71.19%和25.00%,胆管癌组织的阳性率亦明显高于正常组织。2.用流式细胞术检测42例胆管癌组织及20例正常胆管组织CyclinD1和CDC25A的蛋白的表达情况胆管癌组织、正常胆管组织中CyclinD1蛋白表达分别为530.253±27.823、497.416±38.019,胆管癌组织的CyclinD1蛋白表达高于正常组织;胆管癌组织、正常胆管组织中CDC25A蛋白表达分别为534.029±35.674,497.276±42.343,胆管癌组织的CDC25A蛋白表达高于正常组织。3.用RT-PCR方法检测42例胆管癌组织、17例相同个体癌旁胆管组织及其20例正常胆管组织中Survivin、VEGF-C、CyclinD1、CDC25A及PCNA的mRNA表达情况胆管癌组织、同种个体癌旁组织及正常胆管组织中Survivin mRNA相对表达量分别为0.6238±0.080、0.5693±0.0443和0.5684±0.0317,Survivin mRNA在三组之间的表达呈下降趋势;胆管癌组织、同种个体癌旁组织及正常胆管组织中VEGF-C mRNA相对表达量分别为0.6930±0.1078、0.6270±0.0664和0.6105±0.0577,VEGF-C mRNA在三组之间的表达呈下降趋势;胆管癌组织、同种个体癌旁组织及正常胆管组织中CyclinD1 mRNA相对表达量分别为0.6288±0.0942、0.5608±0.0577和0.5845±0.0310,CyclinD1 mRNA在三组之间的表达呈下降趋势;胆管癌组织、同种个体癌旁组织及正常胆管组织中CDC25A mRNA相对表达量分别为0.5937±0.0716、0.5229±0.0575和0.5135±0.0780,CDC25A mRNA在三组之间的表达呈下降趋势;胆管癌组织、同种个体癌旁组织及正常胆管组织中PCNA mRNA相对表达量分别为0.6303±0.0773、0.5692±0.0408和0.5605±0.0331,PCNA mRNA在三组之间表达也呈下降趋势。结论Survivin、VEGF-C、CyclinD1、CDC25A及PCNA mRNA和蛋白在胆管癌组织中表达相一致,均高表达。这些基因和蛋白表达的改变可能是引起胆管癌发生发展的分子机制。
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