卡瓦胡椒素B（Flavokawain B）的抗肺癌活性与分子机制研究

论文摘要

目的：探讨卡瓦胡椒素B对人非小细胞肺癌细胞系的增殖抑制和促凋亡的作用及其分子机理。方法：应用MTT比色法检测不同浓度卡瓦胡椒素B（0、1.1、2.2、4.4、8.8、17.6、44、87.9μM）在48h后对肺癌细胞A549、H446和H460的增殖抑制,计算卡瓦胡椒素B对肺癌细胞生长的抑制率与半数抑制浓度ICso;将不同浓度梯度的卡瓦胡椒素B分别处理非小细胞肺癌A549、H460细胞1d、3d、5d从而确定其对A549、H460细胞的生长曲线。流式细胞仪分析A549、H460细胞在0.1%DMSO对照与8.8μM、17.6μM44gM卡瓦胡椒素B处理24h后的细胞周期分布状况,采用DAPI染色法观测卡瓦胡椒素B对非小细胞肺癌细胞凋亡形态学特征。收集各组药物处理后的A549、H460细胞,采用RIPA裂解法提取总蛋白,通过Western-blot法检测药物作用后PARP、Caspase-7、XIAP、Survivin表达的变化。结果：卡瓦胡椒素B对这三个肺癌细胞株的生长均具有显著的抑制作用,在44gM浓度下具有大约90%的抑制率（P<0.05）,在48小时处理条件下其IC50值分别为16.56μM （A549）、23.30μM （H446）与18.24μM （H460） （P<0.05）。卡瓦胡椒素B处理组G2/M期细胞比例明显增加,与空白对照组比较有统计学意义。肺癌细胞在8.8μM卡瓦胡椒素B处理48h后明显出现典型的凋亡形态变化,包括细胞皱缩、胞膜皱摺或出泡以及核碎裂、固缩,而对照组细胞未见。卡瓦胡椒素B可以通过上调PARP、Caspase-7蛋白表达、下调凋亡抑制蛋白XIAP、Survivin的表达,且呈剂量时间效应。结论：卡瓦胡椒素B对人非小细胞肺癌细胞系的增殖具有明显的抑制作用及诱导凋亡的作用,且其诱导凋亡效应是卡瓦胡椒素B抗肿瘤作用的重要机制之一,与抑制XIAP、Survivin表达、诱导PARP、Caspase-7的活化有关。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 绪论
• 1.1 肺癌概述
• 1.1.1 肺癌定义
• 1.1.2 肺癌病理分类
• 1.1.3 肺癌的病因
• 1.1.4 肺癌的组织发生
• 1.1.5 肺癌发病症状
• 1.1.6 肿瘤发生的分子机制
• 1.2 细胞凋亡的基本理论
• 1.2.1 细胞凋亡的概念
• 1.2.2 细胞凋亡的生物化学特征
• 1.2.3 细胞凋亡分子生物学研究
• 1.2.4 启动细胞凋亡的分子机制
• 1.3 细胞凋亡的调控因素
• 1.3.1 凋亡抑制蛋白
• 1.3.2 凋亡促进蛋白
• 1.4 恶性肿瘤与细胞凋亡
• 1.4.1 细胞凋亡与肿瘤的发生
• 1.4.2 细胞凋亡与肿瘤的预后
• 1.4.3 细胞凋亡与肿瘤的治疗
• 1.5 卡瓦简介
• 1.5.1 植物形态及生态学特性
• 1.5.2 化学成分
• 1.5.3 化学结构
• 1.5.4 研究现状及研究意义
• 1.5.5 课题来源及技术路线
• 第二章 卡瓦胡椒素B对A549细胞增殖抑制和诱导凋亡的研究
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 材料
• 2.1.1.1 肿瘤细胞株
• 2.1.1.2 主要试剂
• 2.1.1.3 主要仪器
• 2.1.2 方法
• 2.2 统计学处理
• 2.3 结果
• 2.3.1 卡瓦胡椒素B对肺癌细胞的增殖影响
• 2.3.2 细胞形态观察
• 2.3.3 卡瓦胡椒素B对细胞凋亡的影响
• 2.3.4 卡瓦胡椒素B对细胞周期的影响
• 2.3.5 卡瓦胡椒素B对PARP、Caspase-7、XIAP及Survivin的影响
• 第三章 讨论
• 3.1 卡瓦胡椒素B对肺癌细胞株的增殖抑制作用
• 3.1.1 卡瓦胡椒素B对肺癌细胞株的细胞毒性作用
• 3.1.2 卡瓦胡椒素B对肺癌细胞株诱发细胞周期阻滞作用
• 3.2 卡瓦胡椒素B对肺癌细胞株的诱导凋亡作用
• 3.2.1 卡瓦胡椒素B对肺癌细胞株诱导凋亡形态学变化
• 3.2.2 卡瓦胡椒素B作用于A549、H460细胞株凋亡通路的调控作用
• 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附录
• 攻读硕士学位期间发表的论文