本文主要研究内容
作者王咏（2019）在《塞内卡病毒A（SVA）VP1与宿主BAD互作激活线粒体凋亡通路的分子机制研究》一文中研究指出：细胞凋亡(Apoptosis)是机体为保障自身稳态平衡通过调控基因表达使细胞发生自主有次序的死亡过程。病毒感染引起的细胞凋亡是宿主为抵御病原体复制和扩散的防御机制。如果细胞凋亡发生在子代病毒组装过程中,则宿主会利用免疫监视和防御功能及时将子代病毒吞噬并排除体外。因此很多病毒会通过某种机制来抑制宿主死亡,以期保证病毒能在宿主内稳定存活。相反,当病毒完成装配后,又会利用宿主的促凋亡机制进而扩散其子代病毒。塞内卡病毒A(Senecavirus A,SVA)是目前塞内卡病毒属唯一成员,它是无囊膜、单股正链小RNA病毒。2002年SVA初次在培养人胎儿视网膜细胞的培养基内被发现。猪作为SVA的易感动物,感染后表现为,吻突或口腔粘膜处会发生完整或破裂的小泡,并且蹄部出现水泡破裂而致使跛行。同时,新生仔猪感染SVA后会发生急性死亡。SVA作为小核糖核酸病毒科的一类新病原,感染宿主后对宿主细胞凋亡产生调控作用不清楚。通过HE染色和石蜡切片荧光TUNEL实验发现,SVA能够引起宿主组织产生明显病理变化,并出现明显的细胞凋亡。为探究SVA对宿主细胞凋亡的作用,首先通过显微镜观察,发现SVA感染能引起PK-15和HEK293T细胞产生明显的细胞病变。通过qPCR实验和流式细胞术检测发现SVA能够在293T细胞中复制,并且与对照相比SVA能显著性的诱导293T细胞凋亡。其次通过Western Blotting及流式细胞术筛选SVA各蛋白表明,SVA结构蛋白VP1具有诱导细胞凋亡功能且呈剂量依赖性。最后,为进一步探索SVA-VP1诱导细胞凋亡的分子机制,通过Annexin-V-FITC/PI染色荧光观察发现,VP1能使细胞发生早期和晚期细胞凋亡。免疫共沉淀、间接免疫荧光以及线粒体分离实验发现,SVA-VP1亚细胞定位于线粒体,并且与促凋亡蛋白BAD在线粒体上发生相互作用。通过瞬时转染BAD表明,BAD能促进VP1诱导的细胞凋亡。然而采用siRNA干扰技术敲低BAD后,VP1诱导凋亡的功能显著性降低。Western Blotting以及qPCR试验检测发现,VP1能够促进BAD及其下游蛋白BAX的表达及Caspase3的剪切活化,但对上游蛋白AKT、JNK及其的磷酸化无影响。而将BAD敲低后,VP1对BAX和Caspase3蛋白水平和mRNA水平的促进作用消失了。通过qPCR检测还发现,在SVA感染细胞后期,BAD能够促进SVA的复制。以上实验表明,VP1依赖于BAD激活线粒体凋亡通路,且BAD促进SVA复制。本研究表明,细胞在感染SVA后,通过其结构蛋白VP1与促凋亡蛋白BAD在线粒体上特异性互作,并依赖于BAD促进促凋亡蛋白BAX和Caspase3的表达及活化,最终导致细胞出现凋亡。本结果有助于揭示SVA利用宿主蛋白影响宿主细胞凋亡及自身复制的分子机制,为更深入的揭示SVA的致病机制提供理论依据。
Abstract
xi bao diao wang (Apoptosis)shi ji ti wei bao zhang zi shen wen tai ping heng tong guo diao kong ji yin biao da shi xi bao fa sheng zi zhu you ci xu de si wang guo cheng 。bing du gan ran yin qi de xi bao diao wang shi su zhu wei di yu bing yuan ti fu zhi he kuo san de fang yu ji zhi 。ru guo xi bao diao wang fa sheng zai zi dai bing du zu zhuang guo cheng zhong ,ze su zhu hui li yong mian yi jian shi he fang yu gong neng ji shi jiang zi dai bing du tun shi bing pai chu ti wai 。yin ci hen duo bing du hui tong guo mou chong ji zhi lai yi zhi su zhu si wang ,yi ji bao zheng bing du neng zai su zhu nei wen ding cun huo 。xiang fan ,dang bing du wan cheng zhuang pei hou ,you hui li yong su zhu de cu diao wang ji zhi jin er kuo san ji zi dai bing du 。sai nei ka bing du A(Senecavirus A,SVA)shi mu qian sai nei ka bing du shu wei yi cheng yuan ,ta shi mo nang mo 、chan gu zheng lian xiao RNAbing du 。2002nian SVAchu ci zai pei yang ren tai er shi wang mo xi bao de pei yang ji nei bei fa xian 。zhu zuo wei SVAde yi gan dong wu ,gan ran hou biao xian wei ,wen tu huo kou qiang nian mo chu hui fa sheng wan zheng huo po lie de xiao pao ,bing ju ti bu chu xian shui pao po lie er zhi shi bo hang 。tong shi ,xin sheng zai zhu gan ran SVAhou hui fa sheng ji xing si wang 。SVAzuo wei xiao he tang he suan bing du ke de yi lei xin bing yuan ,gan ran su zhu hou dui su zhu xi bao diao wang chan sheng diao kong zuo yong bu qing chu 。tong guo HEran se he dan la qie pian ying guang TUNELshi yan fa xian ,SVAneng gou yin qi su zhu zu zhi chan sheng ming xian bing li bian hua ,bing chu xian ming xian de xi bao diao wang 。wei tan jiu SVAdui su zhu xi bao diao wang de zuo yong ,shou xian tong guo xian wei jing guan cha ,fa xian SVAgan ran neng yin qi PK-15he HEK293Txi bao chan sheng ming xian de xi bao bing bian 。tong guo qPCRshi yan he liu shi xi bao shu jian ce fa xian SVAneng gou zai 293Txi bao zhong fu zhi ,bing ju yu dui zhao xiang bi SVAneng xian zhe xing de you dao 293Txi bao diao wang 。ji ci tong guo Western Blottingji liu shi xi bao shu shai shua SVAge dan bai biao ming ,SVAjie gou dan bai VP1ju you you dao xi bao diao wang gong neng ju cheng ji liang yi lai xing 。zui hou ,wei jin yi bu tan suo SVA-VP1you dao xi bao diao wang de fen zi ji zhi ,tong guo Annexin-V-FITC/PIran se ying guang guan cha fa xian ,VP1neng shi xi bao fa sheng zao ji he wan ji xi bao diao wang 。mian yi gong chen dian 、jian jie mian yi ying guang yi ji xian li ti fen li shi yan fa xian ,SVA-VP1ya xi bao ding wei yu xian li ti ,bing ju yu cu diao wang dan bai BADzai xian li ti shang fa sheng xiang hu zuo yong 。tong guo shun shi zhuai ran BADbiao ming ,BADneng cu jin VP1you dao de xi bao diao wang 。ran er cai yong siRNAgan rao ji shu qiao di BADhou ,VP1you dao diao wang de gong neng xian zhe xing jiang di 。Western Blottingyi ji qPCRshi yan jian ce fa xian ,VP1neng gou cu jin BADji ji xia you dan bai BAXde biao da ji Caspase3de jian qie huo hua ,dan dui shang you dan bai AKT、JNKji ji de lin suan hua mo ying xiang 。er jiang BADqiao di hou ,VP1dui BAXhe Caspase3dan bai shui ping he mRNAshui ping de cu jin zuo yong xiao shi le 。tong guo qPCRjian ce hai fa xian ,zai SVAgan ran xi bao hou ji ,BADneng gou cu jin SVAde fu zhi 。yi shang shi yan biao ming ,VP1yi lai yu BADji huo xian li ti diao wang tong lu ,ju BADcu jin SVAfu zhi 。ben yan jiu biao ming ,xi bao zai gan ran SVAhou ,tong guo ji jie gou dan bai VP1yu cu diao wang dan bai BADzai xian li ti shang te yi xing hu zuo ,bing yi lai yu BADcu jin cu diao wang dan bai BAXhe Caspase3de biao da ji huo hua ,zui zhong dao zhi xi bao chu xian diao wang 。ben jie guo you zhu yu jie shi SVAli yong su zhu dan bai ying xiang su zhu xi bao diao wang ji zi shen fu zhi de fen zi ji zhi ,wei geng shen ru de jie shi SVAde zhi bing ji zhi di gong li lun yi ju 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自中国农业科学院的王咏，发表于刊物中国农业科学院2019-07-05论文，是一篇关于塞内卡病毒论文,细胞凋亡论文,机制论文,中国农业科学院2019-07-05论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自中国农业科学院2019-07-05论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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