氯沙坦防治脑卒中的非降压机制：改善ABR功能

论文摘要

高血压病发生率高,在中国成人高血压病的发生率高达18%。脑卒中是高血压病最重要的并发症之一。全球每年新发脑卒中1500万,其中500万人死亡,500万人永久性残废。因此,就脑卒中而言,防止其发生比治疗更重要。如何预防脑卒中的发生?已知血压水平是一个非常重要的危险因素和预测因子,在临床中,抗高血压治疗平均可以降低35-40%的脑卒中发生。但是除血压水平以外,脑卒中的发生肯定还存在其他影响因素,我们有必要找出血压以外的其他决定因子或者预防措施,针对这些因子或措施进行干预,作为预防脑卒中的新方法。动脉压力感受性反射（arterial baroreflex,ABR）功能,是心血管系统活动最重要的自身调节机制之一,ABR功能强弱可以用压力感受性反射敏感性（Baroreflex sensitivity,BRS）这一指标来表示。近年来研究发现,ABR功能的异常,参与了多种心血管系统疾病的发生发展过程。国外的大量文献证实,ABR功能缺陷使得心肌缺血,心律失常,糖尿病等病人的预后较ABR功能正常的病人预后要差。同时,我们课题组在研究中发现,ABR功能缺陷在动脉粥样硬化,心肌梗死,心律失常以及休克等疾病的发生中具有重要的病理意义。ABR功能在脑卒中的发生以及预后的研究中也有重大突破。2003年,Robinson及同事发现,脑卒中病人,BRS低下者,其预后较BRS正常者明显要差。我们课题组也在研究中发现,BRS低的自发性脑卒中大鼠（stroke prone spontanisouslyhypertensive rat,SHR-SP）,其发生脑卒中及其死亡的时间,明显的比BRS高的SHR-SP要早。证实ABR功能可能是预测脑卒中发生的一个重要因子,与脑卒中的发生发展有着密切的联系。沙坦类药物（AT1拮抗剂）是抗高血压一线治疗用药,其代表药物氯沙坦（losartan）为新型的非肽类AT1拮抗剂,氯沙坦通过竞争性拮抗Ⅰ型AngⅡ受体（AT1）,阻断AngⅡ所引起的缩血管和正性肌力等病理生理作用而发挥效应。临床研究表明,氯沙坦具有良好的降压作用,同时也能使致死和非致死脑卒中危险下降。肾素—血管紧张素系统（Renin-angiotension system,RAS）是由肾素、血管紧张素以及受体构成的重要体液系统,在调节心血管系统的正常生理功能与多种心血管系统疾病的病理过程中具有重要的作用。RAS不仅存在于体液系统,而且在肾脏、心脏、血管以及脑组织中也有RAS,协同激肽系统调节局部的生理病理过程。血管紧张素原在肾素的作用下转化成10肽的血管紧张素Ⅰ（angiotensionⅠ,AngⅠ）,后者在血管紧张素转化酶（ACE）作用下转化成血管紧张素Ⅱ（AngiotensionⅡ,AngⅡ）。AngⅡ作用于血管紧张素受体亚型1（angiotension receptor 1,AT1）。先前的大量文献证实,AngⅡ促进了心肌缺血,高血压,心肌肥大,心力衰竭,动脉粥样硬化等疾病发生发展过程。研究发现在脑卒中动物模型以及慢性脑血管疾病的病人中BRS受损且AngⅡ水平明显增高。脑内与心血管活动密切相关的核团如孤束核（nucleus of solitary tract,NTS）等均存在大量Ang受体。NTS微量注射AngⅡ降低ABR的敏感性而不改变功能曲线的调定点。基于这些研究,我们考虑,氯沙坦预防脑卒中除了通过降低血压产生效应,是否可以通过其他的途径发挥作用呢?如果通过非降压而对脑卒中发挥保护作用,其具体机制是什么?是否与ABR功能调节有关呢?为了验证以上假说,我们设计了五个实验:实验一,自发性高血压大鼠（spontansoulsy hypentensive rat,SHR）,给予小剂量AT1受体拮抗剂氯沙坦治疗2周,观察其对血流动力学和BRS影响,然后行大脑中动脉栓塞（Middle Cerebral ArterialOcclusion,MCAO）手术,观察其对急性脑梗死的影响。实验二,向SD大鼠NTS内微量注射AngⅡ后行MCAO手术,观察AngⅡ对于急性脑梗死的影响;实验三,向SHR大鼠NTS内微量注射氯沙坦,观察其对于急性脑梗死的影响。实验四,SD大鼠NTS内微量注射AngⅡ,观察其对BRS影响;实验五,向SHR大鼠NTS内微量注射AT1受体拮抗剂氯沙坦,观察氯沙坦对于BRS的影响;具体如下:方法一,将20只雄性SHR随机分2组,每组10只。连续氯沙坦10mg/kg/d灌胃给药,以生理盐水作为对照组。2周后行股动静脉插管术,术后恢复一天,通过动脉管,将大鼠连接清醒自主血流动力学监测系统,观察大鼠血压和测定BRS,然后行MCAO手术,手术后24h分别对2组大鼠进行神经行为学评分,评分后将大鼠麻醉处死,取脑,冠状连续切片（间隔2 mm）,2%的2,3,5—氯化三苯基四氮唑（TTC）溶液染色,拍照,使用计算机软件计算梗死面积。称取大脑以及梗死区（染色呈白色区域）重。2组间神经行为学评分、梗死面积和梗死重量比较,均采用非配对t检验。二,将20只雄性SD大鼠分2组,每组10只。大鼠麻醉后用脑立体定位仪分别向NTS内注射AngⅡ（100pmol）以及溶剂人工脑脊液（artificial cerebrospinal fluid,ACSF）100nl,然后即行MCAO手术。手术后24h分别对2组大鼠进行神经行为学评分,评分后将大鼠麻醉处死,取脑,冠状连续切片（间隔2mm）,2%的2,3,5—氯化三苯基四氮唑（TTC）溶液染色,拍照,使用计算机软件计算梗死面积。称取大脑以及梗死区（染色呈白色区域）重。2组间神经行为学评分、梗死面积和梗死重量比较,均采用非配对t检验。三,将20只雄性SHR大鼠分2组,每组10只。大鼠麻醉后用微量注射器分别向NTS内注射氯沙坦（100 pmol）以及ACSF（100 nl）,然后即行MCAO手术。手术后24h分别对2组大鼠进行神经行为学评分,评分后将大鼠麻醉处死,取脑,冠状连续切片（间隔2 mm）,2%TTC溶液染色,拍照,使用计算机软件计算梗死面积。称取大脑以及梗死区重（染色呈白色区域）。2组间神经行为学评分、梗塞面积和梗塞重量比较,均采用非配对t检验。四,将20只雄性SD大鼠随机分2组,每组10只。动物腹腔麻醉后,行股动、静脉插管术,术后恢复一天,通过动脉管,将大鼠连接清醒自主血流动力学监测系统,连续记录大鼠血压1小时,然后测定BRS。测定结束后,再麻醉动物,立体定位仪定位,用微量注射器分别向动物NTS内（obex前0.5mm,中线旁开0.5mm,延髓平面下0.5mm）注射AngⅡ（100pmol）以及溶剂人工脑脊液100nl。然后再连接测压系统,分别记录给药后4h、12h、24h血流动力学指标并测定其BRS。给药前后血压及BRS比较采用配对t检验。五,将20只雄性SHR随机分2组,每组10只。动物腹腔麻醉后,行股动、静脉插管术,术后恢复一天,通过动脉管,将大鼠连接清醒自主血流动力学监测系统,连续记录大鼠血压1小时,然后测定BRS。测定结束后,再麻醉动物,立体定位仪定位,用微量注射器分别向动物NTS内（obex前0.5mm,中线旁开0.5mm,延髓平面下0.5mm）注射氯沙坦（100pmo）以及等体积的ACSF100nl。然后再连接测压系统,分别记录给药后4h、12h、24h血流动力学指标并测定其BRS。给药前后血压及BRS比较采用配对t检验。结果一,与生理盐水组比较,氯沙坦组的血压显著降低（p＜0.05）,BRS显著升高（p＜0.05）,脑梗死面积和梗死重量均有显著降低（p＜0.05）。二,与ACSF组比较,AngⅡ组的神经行为学评分、梗死面积和梗死重量均有显著增加（p＜0.05）。三,与ACSF比较,氯沙坦组的神经行为学评分、梗死面积和重量均有显著降低（p＜0.05）。四,与给药前比较,AngⅡ组4h、12h血压显著升高（p＜0.05）,24h血压无明显变化;BRS在4h显著降低（p＜0.05）,12h、24h无显著差异。对照ACSF组血压及BRS在4h、12h、24h均无显著变化（p＞0.05）。五,与给药前比较,氯沙坦组4h、12h、24h血压无明显变化（p＞0.05）;BRS在4h、12h显著升高（p＜0.05）,24h无显著差异（p＞0.05）。对照aCSF组血压及BRS在4h、12h、24h均无显著变化（p＞0.05）。结论氯沙坦可以显著地降低SHR血压水平,改善其反射功能,减轻MCAO诱导的急性脑梗死损伤。孤束核微量注射AngⅡ可以显著地降低SHR反射功能,同时增加MCAO诱导的急性脑梗死损伤;而微量注射氯沙坦可以改善反射功能,并且显著地减轻脑梗死损伤。氯沙坦对急性脑梗死的防治作用,除了降低血压以外,反射功能的改善在其中也发挥着重要的作用,可能的作用部位为孤束核。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩写词
• 前言
• 材料和方法
• 一、试验材料及仪器
• 二、实验方法和步骤
• （一） 动、静脉导管的制备
• （二） 动、静脉插管术
• （三） 清醒自由活动大鼠动态血流动力学监测
• （四） 大鼠ABR功能（BRS）的测定
• （五） 阻断大鼠大脑中动脉（MCAO）方法引起脑局部缺血
• （六） 脑梗死体积测定
• （七） NTS给药方法
• 结果
• 实验一 灌胃给予氯沙坦对大鼠反射功能和急性脑梗死的影响
• 实验二 孤束核注射Ang Ⅱ对大鼠急性脑梗死的影响
• 实验三 孤束核注射氯沙坦对大鼠急性脑梗死的影响
• 实验四 孤束核注射Ang Ⅱ对大鼠反射功能的影响
• 实验五 孤束核注射氯沙坦对大鼠反射功能的影响
• 讨论
• 参考文献
• 综述
• 致谢