甲状腺肿瘤组织中RASSFIA基因启动子区CpG岛甲基化状态的研究

论文摘要

目的:最近研究发现抑癌基因启动子区异常甲基化是基因沉默的主要机制。DNA甲基化所导致的抑癌基因的失活在甲状腺肿瘤的的发生发展过程中发挥重要作用,本研究旨在研究甲状腺肿瘤中Ras相关结构域家族1基因转录本A （Ras association domain farmily 1A, RASSF1A）启动子区异常甲基化状态,以及与患者的临床病理学特征之间的关系,探讨RASSF1A启动子区异常甲基化状态与甲状腺肿瘤发生发展的关系,并为其早期分子诊断、预后监测和靶基因治疗提供客观依据。方法:本研究收集19862007年的石蜡包埋良恶性肿瘤组织94例（其中乳头状癌61例,滤泡性癌15例,髓样癌2例,未分化癌1例,甲状腺腺瘤15例）,以及正常甲状腺组织10例,采用美国Ghemicon公司CpGenomeDNA修饰试剂盒对组织DNA进行亚硫酸氢盐修饰,使用甲基化特异性聚合酶链反应（methylation-specific polymerase chain reaction, MSP）检测手术切除甲状腺组织中RASSF1A启动子区甲基化状态。结果:1.甲状腺良恶性肿瘤中存在RASSF1A启动子区甲基化率67 % （63/94）,其中甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma, PTC）中RASSF1A启动子区甲基化率为68.9% （42/61） ,甲状腺滤泡癌（follicular thyroid carcinoma , FTC ）RASSF1A启动子区甲基化率为73.3% （11/15 ） ,甲状腺腺瘤RASSF1A启动子区甲基化率为46.7% （7/15 ）, 10例正常甲状腺组织中无一例存在RASSF1A启动子高甲基化（0/10 ）。2.RASSF1A基因甲基化阳性率在肿瘤组织中明显高于正常甲状腺组织,差异有统计学意义（P<0.05）;两种不同的癌组织类型（PTC和FTC）中RASSFIA基因启动子区的甲基化阳性率差异无显著性;癌与甲状腺腺瘤之间甲基化阳性率差异无显著性（P>0.05）。3.在76例甲状腺癌（61例PTC和15例FTC）中,RASSF1A基因启动子区甲基化在患者性别、淋巴结转移及肿瘤复发之间差异无统计学意义,但是,RASSF1A基因启动子的高甲基化与年龄相关,40岁以上患者的甲状腺癌组织显著高于小于40岁的患者（P<0.05 ）。结论: 1.RASSF1A基因启动子区在甲状腺肿瘤中处于高甲基化状态,其甲基化程度明显高于正常甲状腺组织,提示RASSF1A基因启动子区甲基化是甲状腺肿瘤组织中常见的分子生物学事件,与甲状腺肿瘤的发生发展密切相关。2.RASSF1A基因启动子区在甲状腺良性肿瘤中有较高的甲基化,并且与甲状腺恶性肿瘤之间甲基化程度没有明显差异,提示RASSF1A基因启动子区甲基化可能是甲状腺肿瘤发生中的早期生物学事件。3.RASSF1A基因启动子区甲基化与甲状腺癌患者的年龄有关,提示RASSF1A甲基化在青年和中老年甲状腺癌中可能具有不同的功能,RASSFIA基因甲基化可能是甲状腺癌的一个预后指标。4.甲状腺肿瘤中RASSF1A基因启动子区甲基化状态的检测,为进一步深入研究去甲基化治疗提供了依据,去甲基化恢复抑癌基因RASSF1A的功能有可能成为甲状腺靶基因治疗的手段之一。5..甲基化特异性的PCR方法用于肿瘤石蜡标本中启动子区甲基化状态检测具有高效、敏感、特异的特点,RASSF1A基因启动子区甲基化有望成为早期诊断甲状腺癌的一种分子标志。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 材料与方法
• 1 材料
• 1.1 病例收集
• 1.2 主要试剂
• 1.3 PCR 引物合成
• 1.4 主要仪器设备
• 2. 方法
• 2.1 临床病理学研究
• 2.2 甲基化特异PCR 方法检测RASSF1A 基因甲基化
• 2.3 数据处理
• 结果
• 1. 临床病理资料
• 2. 病理组织学研究
• 3. MSP 法检测的RASSF1A 基因启动子区甲基化状态
• 4. RASSF1A基因启动子区测序结果及分析
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附表
• 文献综述
• 作者简介
• 致谢
• 石河子大学硕士学位论文导师评阅表