重组腺病毒介导人TIMP-1基因抑制肝癌侵袭和转移的实验研究

论文摘要

目的 肝癌细胞对细胞外基质（ECM）的降解是导致肝癌生长、浸润及转移的重要因素，而基质金属蛋白酶（MMPs）及其抑制因子（TIMPs）在此过程中起着关键作用。本实验通过构建携带人TIMP-1全长cDNA的重组腺病毒AdhTIMP-1，作用于人肝癌细胞株以及肝癌地位模型，探讨其抑制人肝癌细胞侵袭和转移的作用机制。 方法 从人肝细胞癌（HCC）组织中提取总RNA，逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）合成人基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（hTIMP-1）全长cDNA。测序正确后将其正向克隆到腺病毒载体AdEasyTM系统中穿梭质粒pAdTrack-CMV的多克隆位点（MCS），与骨架质粒pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组，经HEK293细胞包装生成携带人TIMP-1的重组腺病毒AdhTIMP-1。用感染复数（MOI）为100的AdhTIMP-1转染人肝癌细胞株（HepG2）：PCR鉴定重组病毒；荧光计数测定重组病毒滴度；Western Blot检测培养液上清中TIMP-1蛋白的表达；半定量RT-PCR检测TIMP-1 mRNA在不同培养时相下的表达；透射电镜观察细胞超微结构变化；MTT实验及生长曲线监测细胞的生长和增殖；Boyden Chamber检测细胞体外侵袭人工基底膜（Matrigel）的能力；裸鼠成瘤实验观察AdhTIMP-1对裸鼠移植性HCC的影响以及抗肿瘤转移的作用；抗CD34单克隆抗体检测肿瘤组织中微血管密度（MVD）判断微血管对肿瘤恶性进程的影响。 结果 构建携带人TIMP-1全长cDNA的重组腺病毒AdhTIMP-1，

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 技术路线
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 文献综述
• 附录英文缩写词表
• 攻读博士学位期间发表论文
• 致谢