病毒载体介导的微型核酶对犬贾第虫端粒酶活性的影响

病毒载体介导的微型核酶对犬贾第虫端粒酶活性的影响

论文摘要

本研究在对犬贾第虫(G. canis)病毒研究的基础上,构建了犬贾第虫病毒(GCV)通用型转染载体,在载体中引入了抗性盒、多克隆酶切位点和内源性启动子,并在G. canis体内持续稳定表达了绿色荧光蛋白基因;根据国外报到的蓝氏贾第虫的端粒重复序列设计了寡聚核苷酸探针[5′-TAGGG-3′]5与Bal31-EcoRI不同消化时间的G. canis基因组DNA进行杂交鉴定,确定了我国G. canis端粒重复序列为(TAGGG)n;在此基础上,采用改进的端粒重复序列扩增法(TRAP)首次对G. canis滋养体时期和包囊时期的端粒酶活性进行了检测,并在滋养体时期检测到很强的端粒酶活性,而包囊时期未检测到端粒酶活性;将两端携带反义GcTERT基因的微型核酶插入到犬贾第虫病毒载体pNEO/GDH/MCS中,构建两个核酶嵌合型犬贾第虫病毒载体TRzS和TRzL,其体外转录体对GcTERT基因体外转录RNA切割效率分别为76.14%和83.42%,同时构建一个反义RNA载体,切割效率为31.56%;体内试验表明TRzS和TRzL对GcTERT基因表达抑制效果显著,最高可分别达84%和72%,端粒酶活性明显降低的同时,转染组虫体细胞数量显著低于正常对照组(P<0.01)。本试验成功的构建和应用了犬贾第虫病毒通用型载体,为进行贾第虫细胞生物学和分子生物学等方面的研究奠定了基础,同时对G. canis端粒酶活性的研究,也为将来以端粒酶作为化疗的靶位点,进行贾第虫病的预防和治疗提供新思路。

论文目录

  • 提要
  • 引言
  • 第一篇 文献综述
  • 第一章 贾第虫病毒及载体研究进展
  • 1 贾第虫病毒的研究进展
  • 2 贾第虫病毒载体的研究进展
  • 第二章 端粒、端粒酶的研究进展及与寄生虫的关系
  • 1 端粒的结构与功能
  • 2 端粒酶的研究进展
  • 3 寄生虫端粒酶的研究进展
  • 第二篇 研究内容
  • 第一章 犬贾第虫病毒通用型转染载体的构建
  • 1 材料与方法
  • 2 结果
  • 3 讨论
  • 4 小结
  • 第二章 犬贾第虫端粒重复序列的鉴定
  • 1 材料与方法
  • 2 结果
  • 3 讨论
  • 4 小结
  • 第三章 犬贾第虫端粒酶活性的检测
  • 1 材料与方法
  • 2 结果
  • 3 讨论
  • 4 小结
  • 第四章 犬贾第虫病毒转染载体介导的微型核酶对 GcTERT 基因体外转录体切割效果的研究
  • 1 材料与方法
  • 2 结果
  • 3 讨论
  • 4 小结
  • 第五章 犬贾第虫病毒转染载体介导的微型核酶对端粒酶活性抑制效果的研究
  • 1 材料与方法
  • 2 结果
  • 3 讨论
  • 4 小结
  • 结论
  • 参考文献
  • 攻博期间发表的学术论文及其他成果
  • 附录 蓝氏贾第虫和犬贾第虫端粒酶逆转录酶基因(TERT)序列比较
  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 致谢
  • 导师及作者简介
  • 相关论文文献

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