中国对虾（Penaeus chinensis）孵化腺细胞的免疫细胞化学及其超微结构研究

论文摘要

在中国对虾（Penaeus chinensis）的早期胚胎发育到一定阶段后必须从卵壳中孵化出来才能进一步发育,而孵化必须依赖于孵化酶（Hatching Enzyme,HE）对卵壳的降解才能完成。孵化腺细胞（Hatching Gland Cells,HGCs）是孵化酶的特异性分泌细胞,它们还是一类孵化前的特定时期出现、孵化后的特定时期消失的一时性细胞（a transient type of cells）。由于动物HE具有高度保守的氨基酸序列,因此许多动物的HGCs均可特异性地被GST-UVS.2抗体识别。为了查清甲壳类动物孵化腺细胞的分化规律,本文以中国对虾的早期胚胎为材料利用GST-UVS.2抗体和辣根过氧化物酶标记的羊抗兔第二抗体对孵化腺细胞的分化时相及其超微结构特征进行了研究。 免疫组织化学反应结果显示,典型的HGCs开始出现于受精后约17小时（孵化前15小时）的胚胎中,一般呈圆形或卵圆形,内含深染的孵化酶原颗粒,其起始分化的部位弥散分布于整个胚体;随发育进程的延续,HGCs的数量逐渐增多,细胞逐渐变大,所含酶原颗粒的浓度也越来越大,并开始向胚胎的前端和背部体表处迁移;至胚胎临近孵化时,HGCs的数量、体积及所含酶原颗粒的浓度达到顶峰,主要集中在头部和背部体表处;胚胎完成孵化后,HGCs所含酶颗粒浓度变淡,细胞也变小,在孵化后10小时的胚胎中孵化腺细胞在胚胎中呈全身弥散分布,孵化后15小时,孵化腺细胞聚缩并沿头胸部的体腔分布;在孵化后20小时孵化酶颗粒已基本消失殆尽。因此,对虾HGCs是一种在孵化前15小时开始出现、到胚胎孵化后20小时消失的一时性细胞。 通过对中国对虾受精后32小时（孵化前5小时）和受精后39小时（孵化后2小时）受精卵的透射电镜观察到:2000倍下,观察到孵化前5小时胚体内存在大量卵黄脂滴和正在发育中的肌丝结构,HGCs沿体表分布,呈不规则形状,部分HGCs有微绒毛结构,部分HGCs表面呈不规则的凸起状,孵化后2h的胚胎HGCs中含有空泡状结构。4000-6000倍下,观察到两个时期的HGCs内含有较

论文目录

• 第一章 孵化腺细胞和孵化酶的研究进展
• 1 水产动物的孵化腺细胞
• 1.1 孵化腺细胞的来源
• 1.2 孵化腺细胞的形态、分泌特征及分化过程
• 1.3 孵化腺细胞分泌孵化酶的过程
• 1.4 甲壳类动物的孵化腺细胞
• 2 水产动物的孵化酶
• 2.1 孵化酶基因的保守性
• 2.2 孵化酶对卵壳的作用机制
• 2.3 甲壳类的孵化酶
• 3 孵化腺细胞中孵化酶基因的表达机制
• 4 孵化腺细胞的研究价值及其应用前景
• 第二章 中国对虾（Penaeus chinensis）孵化腺细胞的形态结构
• 1 实验用品
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验仪器
• 1.3 实验药品
• 1.4 几种常用溶液配方
• 2 实验方法
• 2.1 对虾受精卵的人工培养
• 2.2 胚胎的取材
• 2.3 胚胎的固定
• 2.4 梯度酒精脱水
• 2.5 透明、浸蜡与包埋
• 2.6 石蜡切片
• 2.7 酶标抗体染色
• 2.8 观察、照相
• 3 实验结果
• 3.1 孵化前20h（受精后13h）胚胎
• 3.2 孵化前15h（受精后18h）胚胎
• 3.3 孵化前10h（受精后23h）胚胎
• 3.4 孵化前7h（受精后26h）胚胎
• 3.5 孵化前5h（受精后28h）胚胎
• 3.6 孵化中（受精后33h）胚胎
• 3.7 孵化后2h（受精后35h）胚胎
• 3.8 孵化后5h（受精后38h）胚胎
• 3.9 孵化后10h（受精后43h）胚胎
• 3.10 孵化后15h（受精后48h）胚胎
• 3.11 孵化后20h（受精后52h）胚胎
• 4 讨论
• 第三章 中国对虾（Penaeus chinensis）孵化腺细胞的超微结构
• 1 实验用品
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验仪器
• 1.3 实验药品
• 2 实验方法
• 2.1 对虾受精卵的人工培养
• 2.2 胚胎的取材
• 2.3 胚胎的固定
• 2.4 酒精梯度脱水
• 2.5 环氧树脂包埋
• 2.6 超薄切片和染色
• 3 实验结果
• 3.1 孵化前5h（受精后32h）胚体侧面及孵化腺细胞的结构
• 3.2 孵化后2h（受精后39h）孵化腺细胞的结构
• 3.3 孵化前5h HGC的局部结构
• 3.4 HGC内侧的内皮细胞结构
• 4 讨论
• 参考文献
• 致谢