绵羊卵母细胞孤雌激活与体细胞核移植的研究

论文摘要

自从第一例哺乳动物克隆成功以来,至今多数实验室仍一直沿用显微操作进行去核与注核。其操作过程复杂,需要操作者具有丰富的经验,致使该克隆方法不能普遍推广。为了降低传统核移植方法的技术难度,本研究比较了不同浓度离子霉素、两种不同激活方法对绵羊卵母细胞孤雌发育的影响,优化了去透明带卵母细胞核移植中的几个重要参数（成熟培养时间、融合电压、激活与培养方法）,探索了一种简化的核移植操作程序。 一、绵羊卵母细胞孤雌激活: 1.分别采用oμM、2.5μM和5μM离子霉素+2mM6-DMAP激活去除透明带卵母细胞时,卵裂率分别是18.8%、78.9%和73.9%,囊胚发育率分别为0%、13.7%和11-3%（第7天统计发育结果）;采用同样的激活方法激活保留透明带的卵母细胞时,卵裂率分别为14.5%、72.5%和88.5%,囊胚发育率分别为0%、13.8%和14.7%;表明无论是保留透明带,还是去除透明带的卵母细胞激活后各处理组的卵裂率与囊胚率均高于对照组,但处理组之间无显著差异。 2.在烫制WOWs培养系统中,对去除和保留透明带卵母细胞,用5μM离子霉素+2mM 6-DMAP激活卵裂率分别为70.4%和69.2%,用7%无水乙醇+2mM 6-DMAP激活时,卵裂率分别为33.3%和23.0%。离子霉素处理组的卵裂率显著高于无水乙醇处理组,透明带的去除与否对卵裂率没有产生影响,但各处理组的卵裂卵均未发育为囊胚。 二、绵羊去除透明带卵母细胞体细胞核移植

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 第一部分 锦羊卵母细胞孤雌激活
• 引言
• 1. 材料和方法
• 2. 结果
• 3. 讨论
• 4. 结论
• 第二部分 绵羊去除透明带卵母细胞体细胞核移植
• 引言
• 1. 材料和方法
• 2. 方案结果
• 3. 讨论
• 4. 结论
• 参考文献
• 图版说明
• 文献综述
• 哺乳动物体细胞核移植研究进展
• 1. 核移植
• 2. 哺乳动物的核移植研究概况
• 3. 哺乳动物体细胞核移植的研究进展
• 4. 体细胞核移植的主要技术路线和方法
• 5. 体细胞核移植胚胎核重编程
• 参考文献
• 致谢