辽细辛非挥发性化学成分、质量控制和抗菌活性研究

论文摘要

细辛为马兜铃科植物北细辛Asarum heterotropoides Fr.var.mandshuricum（Maxim）Kitaga.、汉城细辛Asarum sieboldii Mip.var.seoulense Nakai或华细辛Asarum rieboldii Mip.的根及根茎,前两种习称辽细辛,是我国传统中药材,收载于《中国药典》2005年版一部,具有祛风散寒、通窍止痛、温肺化饮的功能,用于治疗风寒感冒、头痛鼻塞、风湿痹痛、痰饮喘咳等症。本研究以辽细辛为研究对象,收集了12个不同产地的辽细辛样品,并对其进行化学成分、抑菌活性和含量测定方法的研究。采用硅胶柱层析、凝胶柱层析以及半制备液相等多种色谱分离技术,结合反复重结晶等分离手段,对辽细辛经70%乙醇回流提取后的氯仿层进行了分离纯化,得到了4个化合物。通过理化性质和波谱分析并结合文献数据确定了其中3个化合物的结构,分别为:L-细辛脂素、L-芝麻脂素和卡枯醇。采用纸片法和96孔板法,考察了辽细辛中L-细辛脂素、L-芝麻脂素、卡枯醇、胡萝卜甘和β-谷甾醇对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌和白色念珠菌的抑菌活性,分别测定了此五种化合物对大肠杆菌等五种细菌的最低抑菌浓度（MIC）。结果表明:L-细辛脂素、L-芝麻脂素、卡枯醇、β-谷甾醇对五种细菌均具有较强的抑菌活性,胡萝卜甘没有抑菌活性。本研究所采用的96孔板法用药量少,结果易于观察,为辽细辛化学成分药效学的研究提供了参考。建立了同时测定辽细辛中L-细辛脂素、L-芝麻脂素和卡枯醇含量的反相高效液相色谱分析方法,以Diamonsil C18为色谱柱,流动相为乙腈-水溶液,等度洗脱,检测波长:勾230 nm。L-细辛脂素、L-芝麻脂素和卡枯醇分别在3.50-35.0μg·mL-1（r=0.9997）,1.52-76.0μg·mL-1（r=0.9992）和0.38-7.60μg·mL-1（r=0.9999）范围内呈良好线性关系,回收率分别为99.7%（RSD=2.7%）,96.7%（RSD=1.9%）和97.7%（RSD=1.5%）。结果表明,本方法简便可靠,重复性好,为辽细辛的质量控制提供了方法。采用正交实验设计,对辽细辛提取工艺进行了优化,辽细辛中L-细辛脂素、L-芝麻脂素和卡枯醇的最佳提取工艺为:加入10倍量乙酸乙酯,超声提取3次,每次20 min。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 前言
• 1.1 辽细辛研究概况
• 1.1.1 辽细辛基源
• 1.1.2 辽细辛本草考证
• 1.1.3 辽细辛化学成分研究
• 1.1.4 辽细辛药理作用
• 1.2 立题依据
• 1.3 研究思路
• 第二章 辽细辛非挥发性化学成分提取分离
• 2.1 辽细辛非挥发性化学成分提取分离流程
• 2.2 化合物结构鉴定
• 2.3 讨论
• 2.4 本章小结
• 第三章 辽细辛非挥发性化学成分含量测定方法研究
• 3.1 样品收集及预处理
• 3.2 辽细辛中L-细辛脂素、L-芝麻脂素和卡枯醇的同时含量测定
• 3.2.1 色谱条件
• 3.2.2 系统适用性实验
• 3.2.3 溶液的制备
• 3.2.4 线性关系考察
• 3.2.5 精密度实验
• 3.2.6 稳定性实验
• 3.2.7 回收率实验
• 3.2.8 样品测定
• 3.3 提取工艺优化
• 3.4 讨论
• 3.5 本章小结
• 第四章 辽细辛非挥发性化学成抗菌活性研究
• 4.1 溶液的配制
• 4.1.1 菌悬液的配制
• 4.1.2 供试品溶液的配制
• 4.2 纸片法测定辽细辛中L-细辛脂素、L-芝麻脂素和卡枯醇的抗菌活性
• 4.3 96孔板法测定L-细辛脂素、L-芝麻脂素和卡枯醇的最低抑菌浓度
• 4.4 讨论
• 4.5 本章小结
• 第五章 结果与讨论
• 参考文献
• 附录
• 硕士在读期间发表论文情况