首页> 正文

雷帕霉素对胶质瘤细胞糖代谢的影响及其抗肿瘤机制研究

2020-12-29阅读(993)

雷帕霉素对胶质瘤细胞糖代谢的影响及其抗肿瘤机制研究

论文摘要

目的：胶质瘤是最常见的原发性脑部肿瘤,且多数切除后有复发可能。目前,针对恶性肿瘤细胞增殖、凋亡等方面的研究十分普遍。临床上使用的抗肿瘤药物大都是通过抑制肿瘤细胞的增殖、促进肿瘤细胞的凋亡来发挥作用的。PI3K/Akt/mTOR信号通路在多种恶性肿瘤中过度激活,调控恶性肿瘤的发生和发展。mTOR是PI3K/Akt信号通路下游重要的激酶,参与调控包括神经胶质瘤在内的多种肿瘤细胞的生存和增殖。雷帕霉素是mTOR的抑制剂,能通过抑制mTOR的活性,参与调控PI3K/Akt/mTOR信号通路在恶性肿瘤细胞中的作用。然而,关于雷帕霉素治疗神经胶质瘤的作用及相关分子机制尚未研究清楚。在恶性肿瘤细胞中,糖酵解水平异常升高,多种糖酵解酶的表达和活性被过度激活,提示糖酵解途径可能为抗癌治疗提供丰富的靶点。最近有研究报道,microRNA-143受mTOR通路调控,且在多种恶性肿瘤中表达异常下调,其靶基因包括糖酵解关键限速酶己糖激酶2（HK2）。然而,关于mTOR通路、miRNA-143以及糖酵解途径在神经胶质瘤中的调控作用及三者之间的关系尚不清楚。本研究利用人神经胶质瘤细胞系U251和CHG-5,探索雷帕霉素在增殖、凋亡、糖酵解等多个方面对神经胶质瘤的调控作用,并探讨相关的分子调控机制。方法：1)用100mM的雷帕霉素分别处理人胶质瘤U251和CHG-5细胞0、6、12、24h,MTT法检测U251和CHG-5细胞的增殖能力。2)用100mM的雷帕霉素处理人胶质瘤U251和CHG-5细胞0、6、12、24h, FCM检测U251和CHG-5细胞凋亡水平的改变。3)用100mM的雷帕霉素处理人胶质瘤U251和CHG-5细胞0、6、12、24h, Western Blotting检测磷酸化的S6激酶蛋白分子的表达水平。4)用100mM的雷帕霉素分别处理人胶质瘤U251和CHG-5细胞0、6、12、24h,检测葡萄糖摄取和乳酸分泌的变化。5)用100mM的雷帕霉素分别处理人胶质瘤U251和CHG-5细胞0、6、12、24h,分别检测己糖激酶、丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶的活性。6)用100mM的雷帕霉素分别处理人胶质瘤U251和CHG-5细胞0、6、12、24h, Western Blotting分别检测己糖激酶、丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶的蛋白表达水平。7)用100mM的雷帕霉素分别处理人神经胶质瘤U251和CHG-5细胞0、6、12、24h, Realtime qRT-PCR检测miR-143的表达变化。结果：1)用100mM的雷帕霉素分别处理神经胶质瘤U251和CHG-5细胞0、6、12、24h,随着处理时间的延长,细胞的增殖呈下降的趋势。2)用100mM的雷帕霉素分别处理神经胶质瘤U251和CHG-5细胞0、6、12、24h,随着处理时间的延长,细胞凋亡呈上升的趋势。3)用100mM的雷帕霉素分别处理神经胶质瘤U251和CHG-5细胞0、6、12、24h,随着处理时间的延长,S6K的磷酸化水平呈下降的趋势,提示mTOR活性受抑制。4)用100mM的雷帕霉素分别处理神经胶质瘤U251和CHG-5细胞0、6、12、24h,随着处理时间的延长,细胞葡萄糖摄取和乳酸分泌量呈下降趋势。5)用100mM的雷帕霉素分别处理神经胶质瘤U251和CHG-5细胞0、6、12、24h,随着处理时间的延长,糖酵解关键酶已糖激酶、丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶的活性明显下调。6)用100mM的雷帕霉素分别处理神经胶质瘤U251和CHG-5细胞0、6、12、24h,随着处理时间的延长,糖酵解关键酶已糖激酶（HK2）、丙酮酸激酶（PK）和乳酸脱氢酶（LDH）的蛋白表达明显下调。7)用100mM的雷帕霉素分别处理神经胶质瘤U251和CHG-5细胞0、6、12、24h,随着处理时间的延长,miR-143的表达水平显著上调。结论：1)雷帕霉素通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路的活性,抑制了神经胶质瘤细胞的增殖,同时诱导了细胞凋亡。2)雷帕霉素通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路的活性,进而抑制了神经胶质瘤细胞糖酵解水平,这可能是导致神经胶质瘤细胞的增殖变慢的重要原因。3)雷帕霉素通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路的活性,上调了miR-143的表达,进而下调了糖酵解限速酶HK2的表达,从而下调了神经胶质瘤细胞糖酵解水平。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 中英文缩略词
  • 技术路线图
  • 引言
  • 第一章 雷帕霉素对人神经胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响
  • 前言
  • 1、材料与方法
  • 1.1 细胞系
  • 1.2 实验仪器及实验试剂
  • 1.2.1 主要实验仪器与耗材
  • 1.2.2 主要实验试剂
  • 2. 实验方法
  • 2.1 细胞培养
  • 2.2 细胞处理
  • 2.3 MTT检测
  • 2.4 Annexin V-FITC&PI凋亡检测
  • 2.5 蛋白样品的制备与浓度测定
  • 2.6 Western Blot检测
  • 2.7 统计分析
  • 3. 实验结果
  • 3.1 雷帕霉素对神经胶质瘤U251和CHG-5细胞增殖的影响
  • 3.2 雷帕霉素对神经胶质瘤U251和CHG-5细胞凋亡的影响
  • 3.3 Western Blot检测Rapamycin对人胶质瘤U251和CHG-5细胞中mTOR活性的影响
  • 4. 讨论
  • 第二章 雷帕霉素通过下调糖酵解水平抑制神经胶质瘤的增殖
  • 前言
  • 一、雷帕霉素处理对人胶质瘤细胞糖酵解水平的影响
  • 1、材料
  • 1.1 细胞系
  • 1.1.1 主要实验仪器与耗材
  • 1.1.2 主要实验试剂
  • 2、实验方法
  • 2.1 细胞培养
  • 2.2 细胞处理
  • 2.3 葡萄糖摄取检测
  • 2.4 乳酸分泌检测,见上海研瑾生物科技人乳酸试剂盒说明书
  • 2.5 统计分析
  • 3、实验结果
  • 3.1 雷帕霉素对神经胶质瘤细胞葡糖糖摄取的影响
  • 3.1.1 雷帕霉素对U251细胞葡糖糖摄取的影响
  • 3.1.2 雷帕霉素对CHG-5细胞葡糖糖摄取能力的影响
  • 3.2 雷帕霉素对神经胶质瘤细胞乳酸分泌的影响
  • 3.2.1 雷帕霉素对U251细胞乳酸分泌的影响
  • 3.2.2 雷帕霉素对CHG-5细胞乳酸分泌的影响
  • 4、讨论
  • 二、雷帕霉素处理对人胶质瘤细胞糖酵解酶的表达及活性的影响
  • 1. 材料
  • 1.1 细胞系
  • 1.1.1 主要实验仪器与耗材
  • 1.1.2 主要实验试剂
  • 2、实验方法
  • 2.1 细胞培养
  • 2.2 细胞处理
  • 2.3 Western Blotting
  • 2.4 己糖激酶活性检测
  • 2.5 丙酮酸激酶活性检测
  • 2.6 乳酸脱氢酶活性检测
  • 2.7 统计分析
  • 3 实验结果
  • 3.1 雷帕霉素对神经胶质瘤细胞己糖激酶活性的影响
  • 3.1.1 雷帕霉素对U251细胞己糖激酶活性的影响
  • 3.1.2 雷帕霉素对CHG-5细胞己糖激酶活性的影响
  • 3.2 雷帕霉素对神经胶质瘤细胞丙酮酸激酶活性的影响
  • 3.2.1 雷帕霉素对U251细胞丙酮酸激酶活性的影响
  • 3.2.2 雷帕霉素对CHG-5细胞丙酮酸激酶活性的影响
  • 3.3 雷帕霉素对神经胶质瘤细胞乳酸脱氢酶（LDH）活性的影响
  • 3.3.1 雷帕霉素对U251细胞乳酸脱氢酶活性的影响
  • 3.3.2 雷帕霉素对CHG-5细胞乳酸脱氢酶活性的影响
  • 3.4 雷帕霉素对神经胶质瘤细胞己糖激酶蛋白表达的影响
  • 3.4.1 雷帕霉素对U251细胞己糖激酶蛋白表达的影响
  • 3.4.2 雷帕霉素对CHG-5细胞己糖激酶蛋白表达的影响
  • 3.5 雷帕霉素对神经胶质瘤细胞丙酮酸激酶蛋白表达的影响
  • 3.5.1 雷帕霉素对U251细胞丙酮酸激酶蛋白表达的影响
  • 3.5.2 雷帕霉素对CHG-5细胞丙酮酸激酶蛋白表达的影响
  • 3.6 雷帕霉素对神经胶质瘤细胞乳酸脱氢酶蛋白表达的影响
  • 3.6.1 雷帕霉素对U251细胞乳酸脱氢酶蛋白表达的影响
  • 3.6.2 雷帕霉素对CHG-5细胞乳酸脱氢酶蛋白表达的影响
  • 4、讨论
  • 三、雷帕霉素处理对人胶质瘤细胞miR-143表达的影响
  • 1、材料
  • 1.1 细胞系
  • 1.2 主要实验仪器与耗材
  • 1.3 主要实验试剂
  • 2、实验方法
  • 2.1 细胞培养
  • 2.2 引物设计
  • 2.3 细胞处理
  • 2.4 总RNA抽提
  • 2.5 基因组DNA的去除
  • 2.6 miRNA-PolyA标记与RT反应
  • 2.7 miRNA-定量PCR检测
  • 2.8 统计分析
  • 3、实验结果
  • 3.1 雷帕霉素对U251细胞中miR-143表达的影响
  • 3.2 雷帕霉素对CHG-5细胞中miR-143表达的影响
  • 4、讨论
  • 结论
  • 本研究创新点
  • 参考文献
  • 综述
  • 参考文献
  • 致谢
  • 攻读学位期间主要的研究成果

    • 相关论文文献

    • [1].神经胶质瘤的生物学研究现状及进展[J]. 中国实验诊断学 2019(01)
    • [2].弥散性神经胶质瘤的临床诊断[J]. 深圳中西医结合杂志 2017(10)
    • [3].神经胶质瘤综合放化疗治疗方法研究综述[J]. 现代养生 2016(24)
    • [4].炎症标志物对神经胶质瘤患者预后的预测价值[J]. 中华全科医学 2019(03)
    • [5].神经胶质瘤中神经鞘氨醇蛋白2的表达及意义[J]. 深圳中西医结合杂志 2019(04)
    • [6].抗抑郁药防治神经胶质瘤的相关性研究进展[J]. 国际药学研究杂志 2017(08)
    • [7].多发性神经胶质瘤一例[J]. 脑与神经疾病杂志 2017(08)
    • [8].浅谈影响成年神经胶质瘤患者术后生存率的相关因素[J]. 当代医药论丛 2014(17)
    • [9].颅内多发性神经胶质瘤的治疗分析[J]. 吉林医学 2011(36)
    • [10].低级神经胶质瘤的分子发病机制[J]. 解剖学研究 2019(06)
    • [11].内源性硫化氢水平与脑低分化神经胶质瘤患者生存率的相关性分析[J]. 解剖学研究 2018(06)
    • [12].多学科护理照顾模式在神经胶质瘤患者围术期中的应用效果[J]. 齐鲁护理杂志 2019(14)
    • [13].脑脊液小分子核糖核酸210对神经胶质瘤早期诊断的研究[J]. 中国慢性病预防与控制 2018(02)
    • [14].~(131)I治疗神经胶质瘤的疗效分析[J]. 继续医学教育 2017(05)
    • [15].我国发现遏制肿瘤生长的有效代谢物[J]. 涟钢科技与管理 2010(05)
    • [16].一例神经胶质瘤伴甲状旁腺功能亢进症患者的护理[J]. 实用临床护理学电子杂志 2019(28)
    • [17].神经胶质瘤患者血浆外泌体lncRNA LINC00511的表达及意义[J]. 中国实用神经疾病杂志 2019(14)
    • [18].幕上神经胶质瘤相关性癫痫发作模式的危险因素分析[J]. 中国临床医学 2019(05)
    • [19].单核细胞与淋巴细胞比值对神经胶质瘤临床预后及异柠檬酸脱氢酶基因1突变的影响[J]. 中国当代医药 2018(18)
    • [20].糖尿病肾病大鼠肾组织中神经胶质瘤相关蛋白-2表达及意义的观察[J]. 中国糖尿病杂志 2015(06)
    • [21].复发神经胶质瘤的治疗及新方法[J]. 河南医学研究 2012(02)
    • [22].我国科学家找到遏制肿瘤有效代谢物——该成果对神经胶质瘤基因突变分子机理的揭示具有开创性意义[J]. 基层医学论坛 2009(13)
    • [23].神经胶质瘤细胞对血管新生作用及其血管生成素-2表达的影响[J]. 中国医药导报 2008(13)
    • [24].3D培养在神经胶质瘤研究中的应用[J]. 现代肿瘤医学 2019(06)
    • [25].小鼠神经胶质瘤单次高剂量放射治疗脑损伤评估[J]. 中华肿瘤防治杂志 2019(02)
    • [26].神经胶质瘤对替莫唑胺耐药机制的研究[J]. 当代医药论丛 2019(07)
    • [27].博尔纳病病毒感染与神经胶质瘤相关性研究[J]. 中国校医 2013(04)
    • [28].中药方剂辅助神经胶质瘤术后化疗的临床疗效及安全性评价[J]. 现代肿瘤医学 2018(13)
    • [29].帕瑞昔布钠对大脑半球神经胶质瘤切除患者术后镇痛的影响[J]. 中国临床研究 2015(04)
    • [30].神经胶质瘤蛋白质双向电泳技术的建立[J]. 中国实用医药 2008(06)

    标签：;  ;  ;  ;  ;  

    雷帕霉素对胶质瘤细胞糖代谢的影响及其抗肿瘤机制研究
    下载Doc文档

    猜你喜欢

    © 2024 毕速过 版权所有 鄂ICP备12018319号-5