共轭亚油酸对人结肠癌细胞Caco-2的作用

论文摘要

共轭亚油酸（Conjugated linoleic acid,CLA）是一组位置和几何异构体的十八碳共轭二烯酸的统称。其双键位于7,9;8,10;9,11:10,12:或11,13位置上,其中每个双键又有顺式和反式两种构型,即每个CLA的位置异构体有四种不同的几何异构体。因此CLA可形成多种同分异构体。 天然的CLA主要存在于反刍动物的奶、肉的脂肪中。最主要的CLA异构体为c9,t11-CLA和t10,c12-CLA。牛瘤胃中c9,t11-CLA是厌氧细菌溶纤维丁酸弧菌生物氢化亚油酸过程中的产物,此外还有一些细菌,如乳酸菌也可将亚油酸生物转化为共轭亚油酸。 CLA有多种生物活性,如抗癌、减肥、抗动脉粥样硬化、抗糖尿病和免疫调节等。近年来,对共轭亚油酸抗癌活性的研究引起了广泛的注意。 Caco-2细胞是一类人结肠癌细胞,研究中建立了Caco-2细胞无血清培养的方法。研究了亚油酸（linoleic acid,LA,纯度为96%）,c9,t11-CLA（纯度为96%）,t9,t11-CLA（纯度为96%）,以及这两种CLA的混合物（体积比为1:1）,在不同浓度（0,25,50,100,200μmol/L）、不同作用时间（1d,2d,3d,4d）下对Caco-2细胞增殖的影响以及相同浓度,相同作用时间下比较了四种物质的活性。同时检查了CLA混合物对Caco-2细胞凋亡的诱导作用。 本研究采用MTT法分析CLA对Caco-2细胞增殖的抑制作用;通过透射电镜观察Caco-2细胞凋亡的形态学变化,同时通过流式细胞仪定量检测Caco-2细胞的凋亡率;采用RT-PCR的方法分析了在加入CLA的混合物后,Caco-2细胞caspase3 mRNA的表达水平的变化。 研究结果表明,四种实验物质在不同浓度、不同作用时间下均可抑制Caco-2细胞的增殖,其对Caco-2细胞增殖的抑制作用与作用时间（p<0.05）和浓度有密切关系。在相同浓度、相同作用时间时,四种物质对Caco-2细胞的抑制活性顺序从大到小分别为:CLA异构体混合物,t9,t11-CLA,c9,t11-CLA,及LA。透射电子显微镜和流式细胞仪的结果表明,CLA混合物可诱导Caco-2细胞产生凋亡,并且与CLA混合物的浓度和作用时间呈依赖关系。RT-PCR的结果表明,

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 英文缩略语
• 第一章 文献综述
• 1.1 引言
• 1.2 膳食中的CLA
• 1.3 CLA的安全性及摄入量
• 1.4 CLA的生理活性
• 1.4.1 改善体质，治疗肥胖
• 1.4.2 抗动脉粥样硬化
• 1.4.3 抗糖尿病
• 1.4.4 免疫调节
• 1.4.5 调节骨组织代谢
• 1.4.6 抗癌
• 1.4.6.1 CLA对胃癌细胞的作用及机制
• 1.4.6.2 CLA对乳腺癌细胞的作用及机制
• 1.4.6.3 CLA对结肠直肠癌细胞的作用及机制
• 1.4.6.4 CLA对肝癌细胞的作用及机制
• 1.5 CLA的应用前景
• 第二章 共轭亚油酸对Caco-2细胞的抑制作用
• 2.1 引言
• 2.2 材料与方法
• 2.2.1 实验材料和仪器设备
• 2.2.1.1 细胞株
• 2.2.1.2 药品及培养基
• 2.2.1.3 培养液及配制
• 2.2.1.4 细胞的冻存和复苏
• 2.2.1.5 仪器及设备
• 2.2.2 方法
• 2.2.2.1 细胞培养
• 2.2.2.2 绘制Caco-2细胞的生长曲线
• 2.2.2.3 Caco-2细胞增殖抑制实验
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 结果
• 2.3.1.1 Caco-2细胞的常规培养与无血清培养液培养
• 2.3.1.2 Caco-2细胞的生长曲线
• 2.3.1.3 CLA异构体及其混合物对Caco-2细胞的增殖抑制
• 2.3.2 讨论
• 2.4 小结
• 第三章 共轭亚油酸混合物诱导Caco-2细胞凋亡的作用
• 3.1 引言
• 3.2 材料和方法
• 3.2.1 材料和仪器设备
• 3.2.1.1 细胞株
• 3.2.1.2 药品及培养基
• 3.2.1.3 仪器及设备
• 3.2.2 方法
• 3.2.2.1 Caco-2细胞凋亡的电镜观察
• 3.2.2.2 流式细胞仪检测Caco-2细胞凋亡
• 3.3 结果与讨论
• 3.3.1 结果
• 3.3.1.1 Caco-2细胞凋亡电镜观察结果
• 3.3.1.2 流式细胞仪检测Caco-2细胞凋亡
• 3.3.2 讨论
• 3.4 小结
• 第四章 共轭亚油酸混合物对Caco-2细胞caspase-3 mRNA表达的影响
• 4.1 引言
• 4.2 材料和方法
• 4.2.1 材料和仪器设备
• 4.2.1.1 细胞
• 4.2.1.2 试剂
• 4.2.1.3 仪器及设备
• 4.2.1.4 软件
• 4.2.2 方法
• 4.2.2.1 Caco-2细胞总RNA的提取（异硫氰酸胍改进法）
• 4.2.2.2 紫外分光光度法测定总RNA量
• 4.2.2.3 甲醛变性凝胶电泳
• 4.2.2.4 RT-PCR法分析Caco-2细胞中caspase-3 mRNA的表达水平
• 4.3 结果与讨论
• 4.3.1 结果
• 4.3.1.1 紫外分光光度法测定Caco-2细胞总RNA
• 4.3.1.2 Caco-2细胞总RNA甲醛变性凝胶电泳
• 4.3.1.3 CLA的混合物对Caco-2细胞中caspase3 mRNA表达的影响
• 4.3.2 讨论
• 4.4 小结
• 第五章 结论与建议
• 5.1 结论
• 5.2 建议
• 附录1
• 附录2
• 参考文献
• 致谢