猪GnRH、GnRHR、EPOR基因的克隆、多态性分析及表达谱构建

论文摘要

繁殖力是养猪业中的最重要生产指标之一,提高猪的繁殖性能将会给养猪业带来巨大经济效应。猪GnRH基因、GnRHR基因、EPOR基因在猪的繁殖过程中起着重要的作用,是与猪繁殖力有关的重要候选基因。本实验采取TD-PCR的方法克隆了猪的GnRHR基因和EPOR基因,并对不同猪品种的GnRH基因、GnRHR基因、EPOR基因的关键部位做了PCR-SSCP多态性分析;应用RT-PCR的方法构建了3头大白猪母猪的EPOR基因的组织表达谱和与下丘脑-脑垂体-性腺轴相关的重要基因,包括GnRH基因、GnRHR基因、FSH基因、FSH受体基因、LH基因、FST基因、inhibin（a）基因、inhibinβ（a）基因、hzhibinβ（b）基因的关联组织表达谱。得到以下的结果:1.克隆了猪GnRHR基因和EPOR基因的大部分基因序列。2.在这三个基因的编码区均未发现多态性。3.在GnRHR基因的5′侧翼序列上发现了两处可能的功能性多态性位点,其中的一处是含有GAGA Box的插入突变序列,另一处由于点突变而形成了一个转录调控蛋白IRF-1结合序列,这两个转录调控序列已经被证明在动物很多基因的转录调控中发挥着至关重要的作用。实验结果表明在含有GAGA Box的插入突变处存在AA型、AB型和BB型三种基因型。基因频率在不同的猪品种间存在着很大的差异性,其中民猪与其它猪品种的差异性最大;IRF-1突变只存在于民猪中,并且只存在AA型和AB型两种基因型。4.根据EPOR基因的表达谱可知EPOR基因在猪的各个组织广泛分布。5.根据下丘脑-脑垂体-性腺轴主要基因的表达谱可推测在下丘脑-脑垂体-性腺轴外不存在GnRH、GnRHR、FSH、FSH受体、LH、FST、inhibin和activin之间的相互作用体系,它们在猪机体内可能还发挥除调节生殖周期以外的其它作用。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 1 引言
• 1.1 猪繁殖性状的研究进展
• 1.1.1 雌激素受体基因
• 1.1.2 卵泡刺激素β亚基基因
• 1.1.3 催乳素受体基因
• 1.1.4 视黄醇结合蛋白4基因
• 1.1.5 其它候选基因
• 1.2 GnRH基因、GnRHR基因及EPOR基因的研究状况
• 1.2.1 GnRH基因和GnRHR基因
• 1.2.2 促红细胞生成素受体基因
• 1.3 分子标记及PCR-SSCP技术
• 1.4 遗传育种中常用的分子标记
• 1.5 分子标记在猪遗传育种中的应用
• 1.6 TD-PCR方法
• 1.7 RT-PCR技术
• 1.8 研究的目的和意义
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 用于克隆基因及多态性分析的样品的采集
• 2.1.2 用于构建组织表达谱的组织样品的采集
• 2.2 试剂与器材
• 2.2.1 主要药品及试剂
• 2.2.2 主要仪器发备
• 2.2.3 缓冲液及主要试剂的配制
• 2.3 试验方法
• 2.3.1 猪EPOR基因、GaRH基因内含子序列和GnRHR基因5′侧翼序列的克隆
• 2.3.2 猪EPOR基因、GnRH基因和GnRHR基因的多态性分析
• 2.3.3 统计分析
• 3 结果与分析
• 3.1 克隆测序结果和序列比较
• 3.1.1 EPOR基因内含子的克隆
• 3.1.2 GnRH基因内含子的克隆
• 3.1.3 GnRHR基因5′侧翼序列的克隆
• 3.2 3个基因在7个猪品种的PCR-SSCP分析结果
• 3.2.1 PCR-SSCP分型结果
• 3.2.2 不同基因型纯合个体测序结果
• 3.2.3 统计分析结果
• 3.3 表达谱的构建结果
• 3.3.1 EPOR基因表达谱的构建
• 3.3.2 下丘脑-脑垂体-性腺轴相关的重要基因表达谱的构建结果
• 4 讨论
• 4.1 关于EPOR基因、GnRH基因克隆中TD-PCR的应用
• 4.2 关于三个基因多态性分析的讨论
• 4.3 组织中mRNA表达状况的检测
• 4.4 相关基因表达谱的分析
• 5 结论
• 致谢
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文