Nlp对肿瘤微环境作用的初步探索

论文摘要

Nlp是中心体相关蛋白,近来发现其具有促癌活性。Nlp高表达肿瘤恶性程度增加,易转移和临床预后差。肿瘤微环境在大多数肿瘤的发生、发展,特别是在肿瘤恶性程度、侵袭性改变中有着重要的作用。在本研究中我们初步探索了肿瘤微环境在该蛋白促癌过程中的意义。我们首先通过体外试验初步探索Nlp对肿瘤微环境的两种重要细胞——内皮和单核巨噬细胞的作用,发现Nlp高表达细胞的条件培养基能够较明显地促进这两种细胞的迁移。这提示Nlp可以通过促进内皮细胞和单核巨噬细胞的迁移能力,参与调节肿瘤微环境。通过转录组芯片和随后的生物信息学分析,我们发现Nlp可以对一些肿瘤微环境相关分子的表达产生影响。采用定量RT-PCR对这些相关分子进行验证,发现CGA和TGM2在mRNA水平有显著差异；同时Western Blot结果显示TGM2和VEGFa在蛋白水平具有明显差异。为了进一步研究Nlp对上述分子的调控机制,我们又对常见的与肿瘤微环境相关的上游分子采用Western Blot和免疫荧光进行观察,发现转录因子如STAT3、SMAD4、NF-kappa B在表达量和细胞定位均无明显变化,而ERK1在Nlp高表达细胞中表达增高,提示其有可能参与NLP对肿瘤微环境的调节作用。综上所述：Nlp可以通过促进内皮细胞和单核巨噬细胞的迁移能力来调节肿瘤微环境,进而促进肿瘤的发生；该作用有可能通过调节VEGFa、CGA、TGM2以及上游ERK1的表达来介导。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 引言
• 材料与方法
• 1. 实验材料
• 1.1. 细胞株和培养条件
• 1.2. 主要试剂
• 1.3. 引物的合成与设计
• 1.4. 主要仪器设备
• 1.5. 生物学软件
• 1.6. 常用试剂的配制
• 2. 实验方法
• 2.1. 细胞的处理
• 2.2. 细胞总RNA和总蛋白的提取
• 2.3. 蛋白和RNA浓度测定
• 2.4. 逆转录与PCR扩增
• 2.5. Western Blot
• 2.6. 免疫荧光
• 2.7. 内皮细胞成管试验
• 2.8. 内皮细胞迁移实验
• 2.9. 单核巨噬细胞迁移实验
• 2.10. 统计分析
• 实验结果
• 1. Nlp稳定高表达HeLa细胞系的鉴定
• 2. H-HeLa细胞和C-HeLa细胞差异转录组分析
• 2.1. H-HeLa细胞和C-HeLa细胞差异转录组谱
• 2.2. H-HeLa细胞和C-HeLa细胞差异转录组生物信息学分析
• 3. Nlp高表达细胞的条件培养基促进内皮细胞和巨噬细胞的迁移能力
• 3.1. 人脐静脉内皮细胞的鉴定
• 3.2. Nlp高表达细胞的条件培养基促进内皮细胞的迁移能力
• 3.3. Nlp高表达细胞的条件培养基促进单核巨噬细胞的迁移能力
• 3.4. Nlp高表达细胞的条件培养基促成管能力检测
• 4. Nlp影响肿瘤微环境分子机制初步探索
• 4.1. Nlp高表达诱导CGA和TGM2在mRNA水平差异表达
• 4.2. Nlp高表达诱导VEGFa和TGM2在蛋白水平差异表达
• 4.3. Nlp对常见的肿瘤微环境相关上游分子的影响
• 讨论
• 总结
• 参考文献
• 附录一
• 文献综述
• 一.VEGF信号通路简介
• 二.针对VEGF信号通路的常见药物
• 三.问题和展望
• 参考文献
• 致谢