费学涛1翟昌林2张松3(通讯作者)
(1徐州医学院研究生部江苏徐州221002)
(2浙江省桐乡市第一人民医院心内科浙江桐乡314500)
(3上海新华医院200092)
【中图分类号】R965【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2012）01-0186-01
降钙素基因相关肽在大鼠心脏的缺血后处理中的分泌表达及作用，探讨如下：
1材料和方法
1.1模型建立雄性SD大鼠,麻醉前给予腹腔注射阿托品2mg/kg，2.5%戊巴比妥钠溶液（30mg/kg）腹腔注射麻醉，麻醉满意后称重（310.8±8.84g）。接DHG-30小型动物呼吸机(浙江医科大学仪器厂)行机械通气,潮气量为3.5mL/kg体重，呼吸频率为80次/分，吸呼比为1：2，吸人氧浓度为50％。分离左侧第3、4肋骨暴露心脏。结扎左冠状动脉前降支。缺血30min后,松开结扎线再灌注2h,建立心肌缺血再灌注损伤模型。结扎后可见到下方大面积心肌表面发绀、室壁运动减弱，提示急性心肌梗死模型建模成功。发绀区充血发红为复灌成功标志。
1.2实验分组40只雄性大鼠随机分为4组:假手术组(n=10)、缺血再灌注组(n=10)、缺血后处理组(n=10)和缺血后处理+CGRP8-37组(n=10)。假手术对照组只穿线不结扎。后处理组结扎前降支30分钟，再灌注前给予10s的短暂复灌/停灌3个循环的后处理，再灌注2h。后处理+CGRP8-37组后处理前心腔注射CGRP8-37（30nmol/kg上海默悉生物科技有限公司）。其余3组同等剂量的生理盐水。
1.3标本收集
1.3.1血浆标本的收集
试验终点时间，打开胸腔，心脏穿刺，取血5ml加入已预先冷冻的抗凝试管中（内含7.5mgEDTA和2500U抑肽酶），4000转/分钟，离心5分钟，取血清置于-70℃低温冰箱保存，供检测CGRP用。
1.3.2心肌标本的收集
试验终点时间，抽血后减下心脏，快速生理盐水清洗干净。-20度速冻5分钟，称重，分离左心室并称重，行TTC染色。置于体积分数10%的甲醛溶液中固定24h，将梗死区心肌剪下，仔细分离梗死区及非梗死区，进行称重。将左心室心肌加入冷磷酸盐缓冲液(4℃)，匀浆器迅速制备心肌匀浆，3000r/min离心15min，取上清-70℃温箱保存，供TNF-α检测。
1.4实验检测血清CGRP、心肌TNF-α测定采用放射免疫法，操作步骤严格按说明书进行。
1.5统计分析所有数据采用SPSS16.0进行统计分析，数值用均数±标准差(x-±s)表示,多组间比较方差齐用方差分析,方差不齐用秩和检验，P<0.05表示结果有统计学意义。
2结果
2.1血浆中CGRP含量变化再灌组低于其他3组(P<0.01)，后处理组高于对照组和再灌组(P<0.01)，后处理+CGRP8-37组高于其他3组(P<0.01)，见表1。
2.2心肌组织中TNF-α含量变化再灌组高于其他3组(P<0.01)，后处理组高于对照组低于再灌组(P<0.01)，后处理+CGRP8-37组高于后处理组低于再灌组(P<0.05)，见表1。
2.3心肌梗死大小与再灌组比较，后处理组梗死区重量/左心室重量（%）、梗死区重量/全心重量（%）均减小(P<0.01)；后处理+CGRP8-37组与再灌组比较，梗死区重量/左心室重量（%）、梗死区重量/全心重量（%）均减小，与后处理组比较增大(P<0.01)。见表2。
3讨论
缺血后处理概念1996年开始萌芽，2003年Zhao等[1]在狗缺血再灌注研究中发现,在心肌缺血再灌注前对心脏进行短周期再灌、停灌处理，可以缩小梗死面积,减轻细胞水肿,改善心功能，因此正式提出了缺血后处理概念。CGRP是一种由降钙素基因表达的生物活性多肽,广泛分布于神经和心血管系统,具有强大的舒张周围血管的作用,对心脏有正性变力和变时效应。CGRP还具有强烈的扩张冠状动脉的作用[2]。CGRP对缺血和再灌注损伤的心肌细胞有保护作用。
本实验研究结果显示再灌组CGRP表达减少，与之前报道相符，考虑CGRP参加缺血再灌注损伤的发生发展过程。缺血后处理使CGRP表达增加，TNF浓度下降，心梗大小减小，证实其对心肌有保护作用。而加入CGRP受体拮抗剂后，与后处理组相比CGRP浓度升高，但TNF-α浓度升高，心梗大小增大，保护作用减弱，说明缺血后处理过程中有内源性CGRP释放，并对心肌起保护作用。与再灌组相比，加入CGRP受体拮抗剂后保护作用减小但是仍然存在并且有统计学差异，说明缺血后处理还通过其他作用机制发挥效应。CGRP的剂量及干预时间，CGRP对远期预后等的影响需进一步研究。
参考文献
[1]ZhaoZQ,CorveraJS,HalkosME,etal.Inhibitionofmyocardialinjurybyischemicpostconditioningduringreperfusion:comparisonwithischemicpreconditioning[J].AmJPhysiolHeartCircPhysiol,2003,285:5792588.
[2]MairJ，LechleitnerP，LangleT，eta1．PlasmaCGRPinacutemyocardialinfarctionlJj．Lancet，1990，335L1)：168．