黄芪遗传转化受体系统的建立及aFGF转化黄芪的研究

论文摘要

黄芪（Radix Astragali）为豆科（Leguminosae）黄芪属（Astragalus）植物膜荚黄芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.及蒙古黄芪Astragalus membenanceus（Fisch.）Bge.Var.mongholicus（Bge.）Hsiao的干燥根。性温,味甘,具有补气固表,利尿托毒,敛疮生肌,益气补中之功效。人类酸性成纤维细胞生长因子是成纤维细胞生长因子超家族成员之一。aFGF具有广泛的生物学作用且没有种属特异性。aFGF具有创伤愈合及组织修复的功能,黄芪有补气固表、敛疮生肌的功效,通过农杆菌介导将aFGF基因导入黄芪中,以期获得具有二者共同累加作用的效果,为开发黄芪在敛疮生肌方面的外用药奠定基础,从而为进一步开发黄芪提供理论依据。本试验分别以黄芪的子叶、下胚轴、叶片、茎段、子叶节为外植体研究了黄芪植株再生的器官发生途径,建立起黄芪的高频再生体系。试验结果表明子叶节为不定芽诱导的最佳外植体、以保留全部子叶最佳,诱导分化培养基组成为MS+BA 2.0mg/L+IBA 0.5mg/L,芽的诱导率可达到90.3%;以下胚轴为外植体在附加BA 2.0 mg/L、IBA 0.5mg/L的MS培养基上芽的诱导率达到26%,子叶、叶片、茎段为外植体无芽的分化;诱导生根最佳培养基为1/2MS+NAA 5.0mg/L。在建立了黄芪高频再生体系的基础上,采用根癌农杆菌GV3101转化黄芪子叶节,成功地将酸性成纤维细胞生长因子（aFGF）导入黄芪。试验中研究了筛选压、根癌农杆菌的侵染浓度、侵染时间、共培养时间等因素对黄芪遗传转化效率的影响,实验结果表明,外植体在MS+2.0mg/L BA+0.5mg/L IBA培养基上预培养3d,农杆菌浓度为OD600=0.3时侵染10 min后培养2d,转移至含有MS+2.0mg/L BA+0.5mg/LIBA+500 mg/LCef+30mg/LKan的培养基诱导筛选培养,2个月后得到69个再生株系,经过PCR初步检测,证实aFGF基因整合到黄芪基因组中。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 1 黄芪的研究现状
• 1.1 黄芪药用价值
• 1.2 我国黄芪属植物种类、分布及应用
• 1.3 黄芪野生资源与栽培生产现状
• 1.4 黄芪愈伤组织诱导和培养
• 1.5 黄芪再生系统的研究现状
• 1.6 黄芪发状根的研究现状
• 2 农杆菌遗传转化的研究进展
• 2.1 Ti质粒介导的遗传转化
• 2.2 Ri质粒介导的遗传转化
• 3 酸性成纤维细胞生长因子的研究现状
• 3.1 aFGF的结构及特点
• 3.2 aFGF的信号传导
• 3.3 aFGF的生物学活性
• 3.4 aFGF的临床应用潜力
• 4 目的与意义
• 第二章 黄芪高效再生体系的建立
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果与分析
• 2.1 愈伤组织诱导及芽的分化
• 2.2 子叶节高效再生体系的建立
• 3 结论与讨论
• 3.1 讨论
• 3.2 结论
• 第三章 黄芪遗传转化体系的研究
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果与分析
• 2.1 菌株生长曲线的测定
• 2.2 Kan浓度对黄芪子叶节不定芽再生的影响
• 2.3 Cef抑菌剂浓度对抑菌效果和芽分化的影响
• 2.4 预培养时间对黄芪子叶节遗传转化的影响
• 2.5 农杆菌浓度对黄芪遗传转化的影响
• 2.6 感菌时间对黄芪子叶节遗传转化的影响
• 2.7 共培养时间对黄芪子叶节遗传转化的影响
• 2.8 PCR检测
• 3 讨论与结论
• 3.1 讨论
• 3.2 结论
• 参考文献
• 图版与说明
• 致谢
• 个人简历