论文摘要
目的：本研究选用鼻咽癌干细胞SP18细胞为对象，观察LMP1羧基末端第三个功能活性区（CTAR3）对SP18细胞侵袭与转移的影响，探讨LMP1-CTAR3影响SP18细胞迁移与侵袭的分子机制。方法：通过脂质体转染建立稳定表达LMP1及其突变体LMP1△252-351的SP18细胞系SP18-LMP1和SP18-LMP1△252-351；采用MTT法、平皿克隆形成实验检测细胞增殖情况；选用划痕实验、transwell实验检测细胞迁移与侵袭情况；利用基因芯片检测SP18-LMP1和SP18-LMP1△252-351间的差异表达基因，使用生物信息学初步分析相关差异表达基因的功能。结果：1.LMP1-CTAR3对鼻咽癌干细胞SP18增殖、迁移与侵袭的影响MTT生长曲线、平皿克隆结果显示，SP18-LMP1细胞和SP18-LMP1△252-351细胞生长速度及克隆形成力明显高于SP18细胞（空白对照）和SP18-LNSX细胞（载体对照）（P<0.05），SP18-LMP1细胞生长速度及克隆形成力高于SP18-LMP1△252-351细胞（P<0.05）。结果提示CTAR3在LMP1促进SP18细胞增殖的过程中可能发挥一定的作用。划痕实验、Transwell实验结果显示，SP18-LMP1细胞和SP18-LMP1△252-351细胞的迁移侵袭能力较SP18细胞和SP18-PLNSX细胞增强（P<0.05），SP18-LMP1△252-351细胞较SP18-LMP1细胞降低（P<0.05）。上述结果说明LMP1具有促进SP18细胞迁移侵袭的能力，其中CTAR3可能发挥重要的作用。2.LMP1-CTAR3影响细胞迁移与侵袭的差异基因筛选采用Agilent4×44K人类全基因组表达谱芯片检测，筛选出差异表达基因314个，其中上调基因180个，下调基因134个。将314个差异表达基因涉及的生物学功能进行“FunctionalAnnotationClustering”分析，结果显示差异表达基因涉及的生物学功能分类聚成24个集合，选取EnrichmentScore分数最高的3个功能集合，主要参与细胞凋亡、迁移运动相关的生物学过程。提示LMP1-CTAR3极大可能与SP18细胞的迁移密切相关。采用DAVID在线分析软件，对差异表达基因进行GeneOntology分类后，共筛选出18个与迁移及侵袭相关的差异表达基因，其中13个上调基因，5个下调基因。综合信号通路、基因生物学分类、基因间相互作用分析，本研究筛选出EFNB2、THBS1、FN1、MMP14等LMP1-CTAR3促进鼻咽癌迁移侵袭的相关差异表达基因，它们可能通过促进细胞黏附、细胞运动，降解细胞外基质及基底膜，促进肿瘤血管生成，从而在鼻咽癌的迁移侵袭中发挥作用。结论：1、CTAR3是LMP1促进鼻咽癌干细胞SP18迁移侵袭的重要功能活性区。2、LMP1可能通过调节EFNB2、THBS1、FN1、MMP14等表达促进鼻咽癌的迁移侵袭。