慢性乙型肝炎病毒感染者特异性T淋巴细胞应答与临床转归

论文摘要

[目的]：研究乙型肝炎病毒（HBV）感染后不同临床转归的人群之间HBV特异性T淋巴细胞应答的差异,探讨慢性HBV感染的免疫学发病机制,为进一步研究乙肝的治疗方法及疫苗研发提供依据。[方法]：从HBV感染者中选取慢性肝炎患者及携带者,在健康人群中招募乙肝康复者及注射疫苗人群,研究对象入选标准依据《慢性乙型肝炎防治指南2010版》。采集研究对象外周血标本分离外周血淋巴细胞（PBMC）,以不加抗原的培养基作为空白对照,以人类免疫缺陷病毒HIV-p24抗原作为阴性对照,植物血凝素（PHA）作为阳性对照,分别用HBsAg, HBcAg及覆盖HBcAg全长的肽段库作为特异性抗原刺激并培养细胞。采用CFSE染色及流式细胞术的方法检测细胞增殖情况。经多色流式细胞术标记细胞表面CD3、CD4、CD8及CD45RA、CCR7,检测不同亚群淋巴细胞的增殖及分化情况。[结果]：按照入组标准共选取了43人入组,其中慢性乙型肝炎患者10人,携带者10人,乙肝感染后康复者13人,注射疫苗对照组10人。结果发现T细胞对乙肝S抗原的特异性增殖较好,而HBcAg及HBcAg肽段库刺激下的T细胞均未发生明显增殖。各组对HBsAg的增殖存在显著性差异,其中乙肝康复者中发生了特异性T细胞增殖的比例为3.40%（1.65%,25.30%）,要显著好于慢性乙型肝炎组的1.25%（0.08%,3.50%）及携带者组的0.40%（0.00%,3.68%）,慢性肝炎组与携带者组之间无明显差异。对发生特异性增殖的T细胞进一步分析,发现CD45RA-CCR7+T细胞比例最高,且各组间存在统计学差异。乙肝康复者组中发生增殖的CD45RA-CCR7+T细胞的比例为52.61%±8.80%,要高于慢性肝炎组的48.06%±13.75%及携带者组的42.03%±13.78%,并与携带者组之间有显著性差异。[讨论]：本研究提示慢性HBV感染者可能存在特异性T细胞的应答缺陷,其对乙肝抗原的特异性增殖要弱于乙肝康复者；T细胞对HBsAg的特异性增殖要好于HBcAg;发生增殖的T细胞中,CD45RA-CCR7+亚群具有重要的作用,其增殖的强弱可能对HBV感染后的临床转归有一定的作用。

论文目录

• 英文缩略词
• 摘要
• ABSTRACT
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 研究对象
• 2.2 样本采集和处理
• 2.3 分离及冻存血浆和PBMC
• 2.4 复苏细胞、CFSE染色及细胞培养
• 2.5 细胞标记及流式细胞仪检测
• 2.6 统计学分析
• 3 结果
• 3.1 HIV-p24抗原刺激下的T淋巴细胞增殖
• 3.2 PHA刺激下的T淋巴细胞增殖
• 3.3 不同乙肝抗原刺激下的特异性T淋巴细胞应答
• 3.3.1 表面抗原刺激下的淋巴细胞增殖
• 3.3.2 肝核心抗原刺激下T淋巴细胞的特异性增殖
• 3.3.3 肝病毒核心抗原全长肽段库
• 3.4 IL-7对细胞增殖的影响
• 3.5 乙肝S抗原刺激增殖T细胞分化情况
• 3.6 CFSE染色对标记CD4、CD8的影响
• 3.7 特异性T细胞增殖与病毒载量的关系
• 4 讨论
• 4.1 非特异性抗原PHA刺激下的免疫应答
• 4.2 对乙肝S抗原的特异性免疫应答
• 4.3 对增殖T细胞的CD45RA/CCR7表型分析
• 4.4 特异性T细胞增殖与HBV-DNA的关系
• 4.5 对乙肝C抗原的特异性应答
• 4.6 对乙肝核心抗原肽段库的特异性应答
• 5 结论
• 6 参考文献
• 致谢
• 知情同意书
• 中国医学科学院北京协和医院伦理审查委员会审核证明