SUMO修饰蛋白的规模鉴定及体内蛋白质SUMO化验证技术的建立

论文摘要

蛋白质翻译后修饰（Post-Translational Modifications,PTMs）作为一种重要的可逆的翻译后水平调节机制,在机体受到外界刺激时对蛋白质功能起着精细的调节作用,有助于机体针对刺激产生快速有效的反应。泛素（Ubquitin）和泛素类似分子（Ubquitin-like proteins,Ubls）是一类非常重要的蛋白质翻译后修饰分子,通过与底物蛋白之间形成一个或多个的修饰来调节底物蛋白的功能。SUMO（smallubiquitin-like modifier）作为泛素类似分子之一,它通过其C末端与底物蛋白的赖氨酸之间形成共价键修饰底物蛋白。研究发现蛋白质的SUMO化参与了细胞周期调控、信号通路、线粒体分裂、RNA的转运、DNA损伤修复和基因组稳定性调节等很多非常重要的细胞生物学过程。通过生物信息学预测和蛋白质组学的方法以及相关的实验验证,发现大量的蛋白能够被SUMO所修饰。然而,以往的蛋白质组学方法都是通过过表达外源性SUMO并利用亲和层析富集鉴定SUMO所修饰的蛋白,并不能反映细胞内真实的SUMO化修饰状态,因此建立一种高通量的富集鉴定内源性SUMO化蛋白的方法是非常必要的。本文中我们建立了一种新的大规模纯化及鉴定内源性SUMO化蛋白的蛋白质组学方法。我们首先分别制备并鉴定了抗人SUMO1和SUMO2的单克隆抗体;随后将SUMO1的抗体与Protein A-agarose beads进行交联制备了抗体亲和层析柱,并利用抗原抗体特异性结合的原理从E18小鼠脑组织蛋白中富集了SUMO1所修饰的蛋白,最后通过高解析离子淌度质谱（High Definition MS,HDMS）技术鉴定所得蛋白,共得到26个潜在的能够被SUMO1所修饰的蛋白,其中有20个新发现的蛋白;利用SUMOplotTM Analysis Program在线软件分析26个蛋白（不包含NP082280）中共有74个SUMO修饰的共有结构域,仅两个蛋白中无SUMO修饰的结构域。同时为了研究某些感兴趣的蛋白质的SUMO化及其功能,我们建立了体内验证蛋白质SUMO化的技术。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 实验材料
• 实验方法
• 研究技术路线
• 实验结果
• 讨论
• 小结
• 不足及展望
• 参考文献
• 文献综述
• 参考文献
• 英汉名词对照
• 个人简历
• 致谢