氧化应激与内质网应激在高糖诱导乳鼠心肌细胞凋亡中的作用

论文摘要

目的利用原代培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞为模型,研究不同浓度葡萄糖对心肌细胞凋亡的影响,探讨活性氧介导的氧化应激与内质网应激在高糖诱导乳鼠心肌细胞凋亡作用机制,阐明氧化应激与内质网应激可能共同参与糖尿病心肌病的发生发展过程。方法1、原代心肌细胞培养采用混合酶（Ⅱ型分散酶和Ⅱ胶原酶）一步消化法分离细胞,将心肌细胞随机分为5组:A组（葡萄糖浓度为5.6mmol/L）;B组（葡萄糖浓度为16.7mmol/L）;C组（葡萄糖浓度为25mmol/L）;D组（葡萄糖浓度为33.3mmol/ L）;E组（葡萄糖浓度为50mmol/ L）。应用MTT和流式细胞术分别检测细胞活性和细胞凋亡率,观察不同浓度葡萄糖对细胞凋亡的影响。2、以高糖诱导的心肌细胞为模型,将培养的心肌细胞分为3组,甘露醇对照组、高糖组和高糖加抗氧化剂组,分别检测各组心肌细胞中活性氧（ROS）和上清液中超氧化物歧化酶（SOD）的含量,以反映心肌细胞的氧化应激水平,再分别利用免疫细胞化学法和RT-PCR检测心肌细胞中内质网应激标志分子GRP78、CHOP和Caspase-12的表达情况。结果1、与A组（5.6 mmol/L组）比较,B组（16.7mmol/L组）心肌细胞活性和细胞凋亡无明显变化,而C组（25mmol/L组）心肌细胞活性降低、细胞凋亡率增加（P<0.05）,随着葡萄浓度的增加,D组（33.3mmol/L组）和E组（50mmol/L组）心肌细胞细胞活性降低、凋亡率显著增加（P<0.01）,提示葡萄糖诱导的心肌细胞凋亡呈浓度依赖性。2、与甘露醇对照组相比,高糖组（25mmol/L）心肌细胞中ROS含量明显增多,SOD含量显著下降,细胞凋亡率升高（P<0.01）,与高糖组相比,抗氧化剂组ROS含量减少（P<0.01）,SOD含量升高（P<0.05）,细胞凋亡率降低（P<0.01）;高糖组心肌细胞中GRP78、CHOP和Caspase-12内质网应激标志分子用免疫细胞化学法检测中表达明显,RT-PCR法检测mRNA表达显著上调（P<0.01）,抗氧化剂（NAC）能阻断高糖心肌细胞中ERS标志分子mRNA的表达,明显下调（P<0.01）。结论1、高糖可以诱导体外培养的心肌细胞凋亡,呈浓度依赖关系。2、抗氧化剂NAC通过抑制ROS的产生,阻断氧化应激和内质网应激参与高糖诱导的心肌细胞凋亡。3、氧化应激反应产生的ROS可能激活内质网应激反应,两者共同参与高糖诱导的心肌细胞凋亡过程。

论文目录

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• 材料与方法
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• 附录
• 文献综述
• 参考文献
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