久效磷对金鱼（Carassius auratus）的遗传毒性研究

论文摘要

久效磷能够诱导雄性金鱼卵黄原蛋白的产生,具有环境雌激素效应和生殖毒性,但关于久效磷遗传毒性的研究报道还很少。本文以金鱼（Carassius Auratus）为试验对象,研究了久效磷对金鱼DNA的损伤,从久效磷导致DNA损伤的类型、导致DNA氧化损伤的量、对抗氧化酶的影响以及对端粒DNA的损伤四个方面探讨了久效磷对金鱼的DNA损伤的机理,为筛选农药的遗传毒性提供理论依据。0.01、0.10和1.00 mg/L久效磷暴露金鱼24 h,金鱼的外周血细胞和肝细胞DNA的损伤与对照相比显著升高;暴露48 h时损伤达到峰值;暴露96 h,损伤有所减轻;1周后损伤降到最低,但与对照相比仍存在极显著差异。在相同的暴露时间下,金鱼外周血细胞DNA损伤随着久效磷暴露浓度的升高而加重,具有剂量-效应关系。通过不同pH条件下的单细胞凝胶电泳和在电泳中添加EndoⅢ和FPG酶处理发现:久效磷暴露48 h,导致了金鱼外周血细胞和肝细胞DNA单链断裂、双链断裂,产生碱不稳定位点,而碱不稳定位点的大量产生是DNA损伤的主要类型;久效磷可以导致金鱼外周血细胞和肝细胞DNA中氧化嘧啶和嘌呤的量显著升高。久效磷暴露可以造成金鱼外周血和肝脏氧化压力的升高。金鱼外周血GPH-Px随着暴露时间延长先降低再升高,96 h达到峰值;肝脏的GPH-Px活性变化趋势也是先降低再升高,在1周达到峰值。金鱼外周血SOD活性无显著变化;肝脏的SOD活性先降低再升高,1周达到峰值。外周血MDA含量24 h降低,48 h升高达到峰值,随后逐渐降低;而肝脏MDA含量24 h显著升高并达到峰值,随后逐渐升高。久效磷暴露48 h可以导致金鱼外周血红细胞端粒DNA的损伤,并且随着暴露浓度的增加,端粒DNA损伤加重,而端粒对氧化损伤比较敏感,又进一步佐证了久效磷导致DNA损伤主要为氧化损伤。综上所述,久效磷对金鱼具有遗传毒性作用,造成了金鱼外周血细胞和肝细胞DNA的损伤,DNA的损伤类型为单链断裂、双链断裂和碱不稳定位点,且碱不稳定位点为久效磷导致DNA损伤的主要形式;久效磷导致了金鱼氧化嘌呤和嘧啶量的显著增加,说明其造成金鱼DNA的氧化损伤;久效磷可以导致金鱼外周血和肝脏氧化压力的升高;同时,久效磷暴露48 h能够导致金鱼外周血端粒的损伤,而端粒对氧化损伤比较敏感,因此,本文研究结果表明久效磷对金鱼DNA的损伤主要为氧化损伤。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 1 有机磷农药的遗传毒性研究进展
• 1.1 有机磷农药污染现状
• 1.1.1 有机磷农药概况及使用现状
• 1.1.2 有机磷农药对水体的污染
• 1.2 有机磷农药遗传损伤的类型
• 1.2.1 基因突变
• 1.2.2 染色体损伤
• 1.2.3 DNA 损伤
• 1.3 有机磷农药遗传毒性检测方法进展
• 1.3.1 DNA 链断裂检测方法
• 1.3.2 荧光原位杂交技术
• 1.3.3 RAPD 技术
• 1.4 主要有机磷农药遗传毒性研究进展
• 1.4.1 甲基对硫磷
• 1.4.2 甲胺磷
• 1.4.3 久效磷
• 1.5 有机磷农药遗传毒性机制的研究
• 1.5.1 氧化损伤
• 1.5.2 烷基化
• 1.6 已检测具有遗传毒性作用的有机磷农药
• 1.7 研究展望
• 1.7.1 有机磷农药遗传毒性机制的研究
• 1.7.2 模式动物的开发
• 1.7.3 开展现场监测
• 1.7.4 发展遗传毒物的筛选标准化方法
• 1.8 本课题研究内容设计
• 2 久效磷对金鱼DNA 的损伤
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 试验动物
• 2.1.2 试验药品和仪器
• 2.1.3 试验方法
• 2.1.4 数据处理
• 2.2 结果与分析
• 2.2.1 久效磷对金鱼外周血DNA 的损伤
• 2.2.2 久效磷对金鱼肝脏DNA 的损伤
• 2.3 讨论
• 2.4 小结
• 3 久效磷对金鱼DNA 损伤机理的初步研究
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 试验动物
• 3.1.2 试验药品和仪器
• 3.1.3 试验方法
• 3.1.4 数据处理
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 不同pH 条件下久效磷对外周血和肝脏DNA 的损伤
• 3.2.2 Endo Ⅲ和FPG 处理条件下，久效磷对外周血和肝脏DNA的损伤
• 3.3.3 久效磷对金鱼外周血和肝脏GSH-Px、SOD 活性和MDA 含量的影响
• 3.3 讨论
• 3.4 小结
• 4 久效磷对金鱼端粒DNA 的损伤
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 试验动物
• 4.1.2 试验药品和仪器
• 4.1.3 试验方法
• 4.2 结果与分析
• 4.3 讨论
• 4.4 小结
• 参考文献
• 致谢