论文摘要
目的:建立牛视网膜微血管内皮细胞选择性分离培养的简便经济方法,并检测视网膜微血管内皮细胞合成分泌的VEGF。方法:剜取新鲜牛眼球,分离视网膜毛细血管碎片,Ⅱ型胶原酶振荡消化,加DMEM培养基于CO2恒温箱培养,分离视网膜微血管内皮细胞,SP法进行鉴定。抽提内皮细胞总RNA,分离纯化mRNA及反转录制备cDNA,PCR条件下扩增VEGF基因片段,凝胶电泳显示VEGF条带。结果:选择性分离培养的牛视网膜微血管内皮细胞多呈扁平短梭形,部分呈多角形,单层镶嵌状排列生长,融合期呈“铺路石样”外观。视网膜微血管内皮细胞对Ⅷ因子相关抗原抗体染色阳性。RT-PCR检测VEGF mRNA,在186bp（base pairs）处可见荧光增强条带,且与浓度成正相关。结论:通过改进实验方法和优化实验条件,可建立牛视网膜微血管内皮细胞选择性分离培养的经济简便方法。内皮细胞能合成分泌VEGF,其量与细胞浓度有关。
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