美洲大蠊活性部位的筛选和泡沫分离技术在其有效部位分离中的应用

论文摘要

美洲大蠊药理作用广泛,药效独特。文献研究与现代药理研究均表明美洲大蠊具有治疗溃疡性结肠炎（UC）和肝炎、肝硬化的作用,其应用也已从民间走向制剂开发。本文针对美洲大蠊抗UC和肝损伤作用,采用动物体内药效学实验,分别筛选抗UC和抗肝损伤活性部位,并进行了提取纯化工艺的筛选和优化、纯化部位药效验证、活性部位标准等研究。主要研究内容如下:首先对美洲大蠊进行了化学成分鉴别,然后采用小鼠体内药效学实验,筛选抗UC活性部位,结果70%、90%乙醇提取物为活性部位,并对其中氨基酸和多肽进行了分析和分离;采用小鼠体内药效学实验筛选抗肝损伤活性部位,结果水提物为有效提取物,蛋白多肽是其中主要成分。对抗肝损伤活性部位进行了提取工艺的筛选及优化:比较回流法、常温磁力搅拌法、碱水浸提法三种提取方法,结果碱水浸提法效果最佳;对提取工艺进行系统研究,考察pH值、料液比、提取时间、提取温度等因素,经正交实验、方差分析、验证实验,得到了优化提取工艺条件为:料液比1:25,浸提时间60min,浸提液pH9,浸提温度40℃。对抗肝损伤活性部位进行了纯化工艺的筛选和优化:对常规纯化技术醇沉法和酸沉法与新型分离技术泡沫分离法进行对比研究,结果泡沫分离法具一定优势;对泡沫分离工艺进行系统研究,采用单因素实验法对泡沫分离工艺进行系统研究,考察了气速、浓度、pH值、进料体积、温度等因素,得到了优化纯化工艺条件为:进料浓度进气速度600mL·min-1,0.45mg·ml-1,pH为4.5,进料体积在1000ml,温度为室温,此时泡沫相蛋白质回收率为67%左右;最终所得泡沫相中总蛋白纯度达58%左右（原料液中蛋白质纯度为29.95%）。对泡沫分离法获得的纯化部位进行抗肝损伤药效验证,确证有效;对抗UC活性部位和泡沫分离产品进行了标准研究,包括性状鉴别、理化鉴别、TLC鉴别和含量测定。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 引言
• 1 美洲大蠊概述
• 1.1 药用历史沿革
• 1.2 化学成分
• 1.3 药理作用
• 2 泡沫分离法概述
• 2.1 泡沫分离法定义
• 2.2 泡沫分离法分类
• 2.3 泡沫分离法的主要影响因素
• 2.4 泡沫分离法的应用
• 2.5 蛋白质等表面活性成分的泡沫分离原理
• 3 立题依据
• 4 研究目的与意义
• 5 研究内容与思路
• 第一章 化学成分鉴别
• 1 仪器与试药
• 2 方法
• 2.1 一般理化鉴别
• 2.2 薄层（TLC）及纸层析（PC）试验
• 3 结果
• 3.1 一般理化鉴别结果
• 3.2 薄层（TLC）或纸层析（PC）试验结果
• 4 讨论
• 第二章 美洲大蠊抗溃疡性结肠炎活性部位筛选和研究
• 1 美洲大蠊抗UC实验研究
• 1.1 实验分组
• 1.2 实验结果
• 1.2.1 小鼠体重变化
• 1.2.2 结肠肉眼观察及病理切片
• 1.2.3 中性粒细胞髓过氧化物酶（MPO）活性测定
• 1.3 结论
• 2 美洲大蠊提取物抗UC有效提取物研究
• 2.1 氨基酸组成分析
• 2.1.1 仪器
• 2.1.2 分析条件
• 2.1.3 样品制备
• 2.1.4 测定方法
• 2.2 分子量分析
• 2.2.1 SDS-PAGE凝胶电泳测蛋白质分子量原理
• 2.2.2 电泳试剂的配制
• 2.2.3 电泳
• 2.3 多肽的分离
• 2.4 小结
• 第三章 美洲大蠊抗肝损伤活性部位筛选
• 1 材料与动物
• 1.1 美洲大蠊水磁力搅拌提取物制备
• 2 方法
• 4肝损伤模型复制方法'>2.1 小鼠CCl₄肝损伤模型复制方法
• 2.2 分组与给药剂量、方法
• 2.3 观察指标检测
• 2.4 数据处理
• 3 结果
• 3.1 美洲大蠊各部位提取物对CCL4所致急性肝损伤模型小鼠血清AST、ALT活性及肝指数的影响
• 3.2 肝组织病检
• 4 小结
• 5 讨论
• 第四章 抗肝损伤活性部位制备工艺研究
• 1 材料与仪器
• 1.1 材料
• 1.2 仪器
• 2 考察指标的测定
• 2.1 蛋白质含量测定
• 3 方法与结果
• 3.1 提取工艺考察
• 3.2 提取工艺优化
• 3.3 提取工艺条件优化
• 3.4 最佳提取工艺验证试验
• 3.5 纯化工艺研究
• 第五章 美洲大蠊提取液泡沫分离工艺优化
• 1 蛋白质类表面活性剂界面性质的研究
• 1.1 实验材料与仪器
• 1.2 实验方法
• 2 美洲大蠊提取液泡沫分离工艺研究
• 2.1 材料与仪器
• 2.2 方法
• 2.3 结果与分析
• 3 泡沫分离纯化产品药效学验证
• 3.1 材料
• 3.2 方法
• 3.3 结果
• 第六章 活性部位标准研究与“随效质量标准”探讨
• 1 材料与仪器
• 1.1 材料
• 1.2 仪器
• 2 抗 UC活性部位标准研究
• 2.1 性状
• 2.2 理化鉴别
• 2.3 薄层色谱鉴别
• 2.4 氨基酸含量测定
• 3 美洲大蠊泡沫分离产品标准研究
• 3.1 性状
• 3.2 鉴别
• 3.3 蛋白质含量测定
• 4 “随效质量标准”探讨
• 4.1 中药“随效质量标准”的提出
• 4.2 中药“随效质量标准”内涵
• 第七章 结论与展望
• 1 结论
• 2 展望
• 致谢
• 参考文献
• 在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果