硫化氢对幽门螺杆菌诱导的炎症相关因子NF-κB及IL-8 mRNA表达的影响

论文摘要

第一部分幽门螺杆菌感染胃溃疡CSE、NF-κB及IL-8mRNA表达变化目的研究幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,H.pylori）感染胃溃疡患者胱硫醚-γ-裂解酶[cystathionine-y-lyase,CSE,为硫化氢合成酶,间接反映内源性硫化氢（hydrogen sulfide,H2S）含量],及其炎症相关因子NF-κB和[L-8mRNA表达情况,探讨H2S在H.pylori相关性胃溃疡中的作用及机制。方法收集2011年4月至2011年12月就诊于湘雅三医院行胃镜检查的患者共计108例,通过快速尿素酶试验（RUT）、14C尿素呼气试验（14C-UBT）.病理学检查及H.pylori培养,明确H.pylori感染情况,其中正常对照组、H.pylori阴性胃溃疡组和H.pylori阳性胃溃疡组各36例。采用逆转录PCR技术检测胃黏膜组织CSE、NF-κB及IL-8mRNA表达,用灰度分析仪测量各灰度值,计算各灰度值与内参（GAPDH）灰度值之比；并对各基因之间的相关性进行分析。结果1、各组CSE、NF-κB及IL-8mRNA表达1) CSE mRNA表达：H.pylori阴性胃溃疡组和H.pylori阳性胃溃疡组较正常对照组CSE mRNA表达升高（p<0.05）；H.pylori阳性胃溃疡组较H.pylori阴性胃溃疡组CSE mRNA表达升高（p<0.05）。2) NF-κB mRNA表达：H.pylori阴性胃溃疡组和H.pylori阳性胃溃疡组较正常对照组NF-κB mRNA表达升高（p<0.05）；H.pylori阳性胃溃疡组较H.pylori阴性胃溃疡组NF-κB mRNA表达升高（p<0.05）。3) IL-8mRNA表达：H.pylori阴性胃溃疡组和Hpylori阳性胃溃疡组较正常对照组IL-8mRNA表达升高（p<0.05）；H.pylori阳性胃溃疡组较H.pylori阴性胃溃疡组IL-8mRNA表达升高（p<0.05）。2、各组三种基因表达的相关性分析：1)正常对照组：CSE与NF-κB mRNA、CSE与IL-8mRNA表达均无相关性（p>0.05）；NF-κB与IL-8mRNA表达呈正相关（r=0.78）（p<0.05）。2) H.pylori阴性胃溃疡组：CSE与NF-κB mRNA表达（r=0.98）、CSE与IL-8mRNA表达（r=0.95）、NF-κB与IL-8mRNA表达（r=0.90）均呈正相关（p<0.05）。3) H.pylori阳性胃溃疡组：CSE与NF-κB mRNA表达（r=0.99）、CSE与IL-8mRNA表达（r==0.85）、NF-κB与IL-8mRNA表达（r=0.90）均呈正相关（p<0.05）。结论胃溃疡患者胃黏膜组织CSE mRNA表达升高,及与炎症相关因子NF-κB和IL-8mRNA表达呈正相关,并与H.pylori感染有关,提示H.pylori可能通过NF-κB途径刺激IL-8mRNA产生,导致炎症反应及CSE mRNA表达升高。第二部分硫化氢对幽门螺杆菌感染GES-1细胞CSE.NF-κB及IL-8mRNA表达的影响目的探讨外源性硫化氢（hydrogen sulfide, H2S）对H.pylori感染的GES-1细胞CSE、NF-κB及IL-8mRNA表达的影响。方法GES-1细胞体外培养24h后,待细胞融合达到80%～90%时分为A组（对照组,不加H.pylori与NaHS）、B组（H.pylori组）、C组（NaHS组,分别加入50μM、100μM、200μM、400μM NaHS,依NaHS浓度分为C1、C2、C3、C4组）,D组（H.pylori+NaHS组,分别加入H.pylori与50μM、100μM、200μM、400μM NaHS,依NaHS浓度分为D1、D2、D3、D4组）。H.pylori与细胞数量之比为100：1,每组分别培养3h、6h及12h,采用逆转录PCR技术检测各组GES-1细胞CSE、NF-κB及IL-8mRNA表达情况,用灰度分析仪测量各灰度值,计算其与内参（GAPDH）灰度值之比,并对各基因之间的相关性进行分析。结果1、各组GES-1细胞CSE、NF-κB及IL-8mRNA表达（1） CSE mRNA表达：同一时间点不同分组间比较显示,H.pylori组、H.pylori组、H.pylori+100μM NaHS组较对照组表达增加（p<0.05）,200μM NaHS组与400μM NaHS组较对照组表达降低（p<0.05）；NaHS各组、H.pylori+200μM NaHS组及H.pylori+400μM NaHS组较H.pylori组表达降低（p<0.05）。同一分组不同时间点两两比较显示,6h与12h H.pylori组、200μM NaHS组、400μM NaHS组、H.pylori+50μM NaHS组及H.pylori+100μM NaHS组较3h时表达降低（p<0.05）。（2）NF-κB mRNA表达：同一时间点不同分组间比较显示,H.pylori组、H.pylori+50μM NaHS组、H.pylori+100μM NaHS组较对照组表达增加（p<0.05）,其余各组较对照组无统计学差异（p>0.05）；NaHS各组、H.pylori+200μM NaHS组及H.pylori+400μM NaHS组较H.pylori组表达均降低（p<0.05）。同一分组不同时间点两两比较显示,6h与12h H.pylori组、H.pylori+50μM NaHS组、H.pylori+100μM NaHS组较3h时表达降低（p<0.05）。（3） IL-8mRNA表达：同一时间点不同分组间比较显示,H.pylori组、H.pylori+NaHS各组较对照组表达增加（p<0.05）,NaHHS各组与对照组比较无统计学差异（p>0.05）；NaHS各组、H.pylori+200μM NaHS组及H.pylori+400μM NaHS组较H.pylori组表达均降低（p<0.05）。同一分组不同时间点两两比较显示,6h时H.pylori组、H.pylori+50μM NaHS组及H.pylori+100μM NaHS组较3h时表达升高（p<0.05）；12h时H.pylori组、H.pylori+50μM NaHS组及H.pylori+100μM NaHS组较6h时表达降低（p<0.05）2、GES-1细胞CSE、NF-κB及IL-8mRNA的相关性H.pylori干预GES-1细胞,及200μM、400μM NaHS干预H.pylori感染的GES-1细胞3h、6h及12h时,CSE、NF-κB及IL-8mRNA表达之间均呈正相关（p<0.05）。结论1、H.pylori能诱导GES-1细胞NF-κB和IL-8mRNA表达,及上调CSE mRNA表达。2、200μM、400μMNaHS能抑制H.pylori感染诱导的GES-1细胞NF-κB和IL-8mRNA表达及下调CSE mRNA表达,可能对H.pylori感染的GES-1细胞起保护作用。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 英文缩略词表
• 第一部分 幽门螺杆菌感染的胃溃疡CSE、NF-κB及IL-8 mRNA表达变化
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 1.2.1 研究对象、实验材料及试剂、仪器
• 1.2.2 实验方法
• 第三章 结果
• 1.3.1 RNA完整性鉴定
• 1.3.2 各组CSE、NF-κB及IL-8 mRNA表达情况
• 1.3.3 各组CSE、NF-κB及IL-8 mRNA之间相关性分析
• 第四章 讨论
• 4.1 胃溃疡中CSE mRNA表达变化
• 4.2 胃溃疡中NF-κB与IL-8 mRNA表达变化
• 4.3 胃溃疡中CSE mRNA表达变化与NF-κB、IL-8 mRNA的关系
• 4.4 CSE、NF-κB及IL-8 mRNA表达与H.pylori的关系
• 第五章 结论
• 参考文献
• 第二部分 硫化氢对幽门螺杆菌感染GES-1细胞CSE、NF-κB及IL-8 mRNA表达的影响
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 2.2.1 菌株、细胞
• 2.2.2 主要试剂及仪器
• 2.2.3 方法
• 第三章 结果
• 2.3.1 各组GES-1细胞形态学改变
• 2.3.2 RNA完整性鉴定
• 2.3.3 各组不同时间点GES-1细胞CSE mRNA表达
• 2.3.4 各组不同时间点GES-1细胞NF-κB mRNA表达
• 2.3.5 各组不同时间点GES-1细胞IL-8 mRNA表达
• 2.3.6 GES-1细胞CSE、NF-κB及IL-8 mRNA表达之间的相关性分析
• 第四章 讨论
• 2.4.1 H.pylori对胃上皮细胞CSE、NF-κB及IL-8 mRNA表达的影响
• 2.4.2 NaHS对胃上皮细胞CSE、NF-κ B及IL-8 mRA表达影响
• 2.4.3 NaHS对H.pylori感染胃上皮细胞CSE、NF-κB及IL-8 mRNA表达影响
• 第五章 结论
• 第六章 总结与展望
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间主要的研究成果