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与疾病相关的蛋白质酪氨酸磷酸酶与酪氨酸磷酸激酶的研究 ——JAK2突变体对真性红细胞增多症的致病作用及以线虫为模型研究酪氨酸磷酸酶PRL的功能

2020-11-23阅读(971)

与疾病相关的蛋白质酪氨酸磷酸酶与酪氨酸磷酸激酶的研究 ——JAK2突变体对真性红细胞增多症的致病作用及以线虫为模型研究酪氨酸磷酸酶PRL的功能

论文摘要

蛋白质酪氨酸磷酸酶与蛋白质酪氨酸激酶协同调控酪氨酸的磷酸化,在细胞增殖、分化和转化等生理和病理过程中发挥重要的调控作用,对人类的健康至关重要。蛋白质酪氨酸激酶JAK2与造血功能密切相关。本研究应用等位基因特异性PCR技术,在健康人中筛查JAK2V617F突变体,经DNA序列分析验证,结果发现JAK2的突变率达到0.3%,远远高于真性红细胞增多症（PV）的发病率,而且JAK2的突变与造血细胞的增殖密切相关。本研究为JAK2V617F作为PV早期诊断及预后的标记物提供了理论依据。蛋白质酪氨酸磷酸酶PRLs与肿瘤的转移密切相关。本研究应用Western blotting技术发现PRL主要在线虫L2及L3幼虫期表达;应用免疫组化染色法发现PRL在线虫肠道中特异性的表达;应用RNAi技术成功的干扰了PRL在线虫中的表达,阐明了PRL的生物学功能,PRL在线虫生命周期的调节中发挥重要的作用,干扰PRL的表达明显延长了线虫的寿命。

论文目录

  • 第一篇 酪氨酸激酶 JAK2 与真性红细胞增多症
  • 第一章 前言
  • 第一节 酪氨酸激酶的分类
  • 1. 受体型蛋白激酶
  • 2. 非受体型蛋白激酶
  • 第二节 JAK 家族酪氨酸激酶与 JAK-STAT 信号转导途径
  • 1. JAK 家族酪氨酸激酶
  • 2. JAK-STAT信号转导途径
  • 3. JAK/STAT 信号转导通路与疾病的关系
  • 第三节 JAK2 的突变与真性红细胞增多症
  • 1. 真性红细胞增多症
  • 2. PV 发病机理的研究进展
  • 第四节 研究目的与理论意义
  • 1. 研究目的
  • 2. 理论意义
  • 参考文献
  • 第二章 等位基因 PCR 检测 JAK2V617F 的基因突变
  • 第一节 实验材料
  • 第二节 实验方法
  • 1. 收集全血标本及提取基因组 DNA
  • 2. 基本分子生物学实验方法
  • 3. pKS-JAK2 及pKS-JAK2V617F 的克隆
  • 4. 应用等位基因特异性 PCR 检测 JAKV617F 突变体
  • 第三节 结果与讨论
  • 1. pKS-JAK2 及pKS-JAK2V617F 的克隆
  • 2. ASP 检测 JAK2V617F 突变体的敏感性及特异性分析
  • 3. JAK2V617F 的点突变频率检测
  • 4. 检测样本的血常规检测结果分析
  • 第三章 结论
  • 参考文献
  • 第二篇 应用 RNAi 技术研究线虫酪氨酸磷酸酶 PRL 的生物学功能
  • 第一章 前言
  • 第一节 PRL 亚家族酪氨酸磷酸酶
  • 第二节 RNA 干扰
  • 1. RNAi 的机理
  • 2. RNAi 的特征
  • 3. RNAi 的生物学功能
  • 4. 待解决的问题
  • 第三节 秀丽新杆线虫
  • 1. 什么是线虫
  • 2. 为什么线虫是一个优秀的模式生物
  • 3. RNAi 在线虫中的实现方法
  • 第四节 线虫生命周期的调节
  • 第五节 研究目的和理论意义
  • 1. 研究目的
  • 2. 理论意义
  • 参考文献
  • 第二章 cPRL 基因的克隆表达
  • 第一节 实验材料
  • 第二节 实验方法
  • 1. 基本分子生物学实验方法
  • 2. 引物设计
  • 3. 目的片段的扩增
  • 4. 克隆载体的构建和测定
  • 5. 表达载体的构建和诱导表达
  • 第三节 结果与讨论
  • 1. 目的片段的扩增
  • 2. 克隆载体的构建
  • 3. 表达载体构建的结果验证
  • 4. 目的蛋白的可溶性表达
  • 本章小结
  • 参考文献
  • 第三章 cPRL 基因表达产物的分离纯化及抗体制备
  • 第一节 实验材料
  • 第二节 实验方法
  • 1. 线虫 PRL 蛋白的分离纯化
  • 2. 线虫 PRL 抗体的制备
  • 3. 线虫 PRL 抗体的纯化
  • 第三节 实验结果
  • 1. cPRL蛋白的分离纯化
  • 2. 免疫家兔后抗体效价的检测
  • 3. 多克隆抗体经纯化后抗体效价的检测
  • 本章小结
  • 第四章 干扰cPRL 基因后对线虫表型的影响
  • 第一节 实验材料
  • 第二节 实验方法
  • 1. 表达cPRL dsRNA 菌株的构建
  • 2. 对照组菌株的构建
  • 3. 线虫的一般培养
  • 4. 对线虫cPRL 基因的干扰
  • 5. 干扰后对线虫表型的观测
  • 6. 线虫cPRL 基因表达位点的研究
  • 7. 研究线虫cPRL 基因在线虫生命周期的表达
  • 第三节 实验结果
  • 1. dsRNA 表达载体的构建
  • 2. 对照组细菌构建
  • 3. Western Blotting 检测干扰效果
  • 4. 干扰后线虫表型变化的观测
  • 5. cPRL 表达位点的研究
  • 6. 线虫cPRL 基因在线虫发育时期中表达的研究
  • 本章小结
  • 第五章 结论
  • 攻博期间发表的学术论文及其他成果
  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 致谢

    • 相关论文文献

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