蛋白质的光谱法研究

论文摘要

本论文主要应用共振光散射光谱法、荧光光谱法、紫外可见光谱法以及透射电镜技术对蛋白质的测定、蛋白质与胶体金及染料的相互作用进行了系统的研究。研究了共振光散射技术在蛋白质测定中的应用。着重研究了表面活性剂及其络合物作为共振光散射探针在蛋白质测定中的应用。提出了三种测定蛋白质的共振光散射光谱法,将十二烷基苯磺酸钠、金丝桃苷-十六烷基三甲基溴化铵、十六烷基三甲基溴化铵-十二烷基苯磺酸钠共振光散射探针成功地应用到人补体C4、纤维结合蛋白及牛血清白蛋白的测定。对各物质及其相互作用后的共振光散射光谱进行了详细地研究,解释了共振光散射强度增强的原因。考查了影响共振光散射强度的各种因素,如pH、反应时间、共振光散射探针浓度及共存离子等。实验结果表明,所选择的共振光散射探针可以成功地用于蛋白质的测定。采用荧光猝灭法、紫外可见光谱法、共振光散射光谱法和透射电镜技术研究了蛋白质与胶体金及染料的相互作用。用半定量参数-凝聚量表征了不同酸度条件下胶体金与蛋白质的相互作用。研究了胶体金与蛋白质及染料相互作用的光谱特性,获得了它们之间相互作用的一些热力学常数、结合位点数及作用力类型等信息。

论文目录

• 提要
• 第一章 绪言
• 1.1 光散射类型
• 1.1.1 弹性散射
• 1.1.1.1 瑞利散射
• 1.1.1.2 米氏散射
• 1.1.2 非弹性散射
• 1.1.2.1 拉曼散射
• 1.1.2.2 布里渊散射
• 1.1.3 准弹性散射
• 1.2 共振光散射技术概述
• 1.2.1 不同体系光散射的描述
• 1.2.2 共振光散射的波长
• 1.2.3 共振光散射的强度
• 1.3 共振光散射技术的发展历程、应用及其新技术
• 1.3.1 共振光散射技术的发展历程
• 1.3.2 共振光散射技术的应用
• 1.3.2.1 蛋白质和氨基酸的测定
• 1.3.2.2 核酸的测定
• 1.3.2.3 无机离子的测定
• 1.3.2.4 其他物质的测定
• 1.3.3 目前发展的新的共振光散射技术
• 1.4 荧光猝灭技术概述
• 1.4.1 猝灭类型
• 1.4.2 结合常数及结合位点的确定
• 1.4.3 热力学常数及相互作用力类型的确定
• 1.4.4 共振能量转移
• 1.5 本论文研究的目的和主要内容
• 1.6 参考文献
• 第二章 蛋白质和表面活性剂相互作用的共振光散射光谱研究及其分析应用
• 2.1 实验部分
• 2.1.1 仪器与试剂
• 2.1.1.1 仪器
• 2.1.1.2 试剂
• 2.1.2 实验方法
• 2.1.2.1 SDBS-C4 体系
• 2.1.2.2 Hy-CTMAB-Fn 体系
• 2.1.2.3 CTMAB- SDBS-BSA 体系
• 2.1.3 仪器参数
• 2.2 SDBS- C4 体系共振光散射光谱的研究
• 2.2.1 表面活性剂与人补体C4 的相互作用
• 2.2.2 SDBS 与人补体C4 相互作用的光谱特征
• 2.2.3 实验条件的优化
• 2.2.3.1 pH 和反应时间的影响
• 2.2.3.2 SDBS 浓度的影响
• 2.2.3.3 共存物质的影响
• 2.2.3.4 标准曲线
• 2.2.4 样品分析
• 2.3 Hy-CTMAB-Fn 体系共振光散射光谱的研究
• 2.3.1 体系的光谱特征
• 2.3.2 实验条件的优化
• 2.3.2.1 pH 和反应时间的影响
• 2.3.2.2 CTMAB 浓度的影响
• 2.3.2.3 金丝桃苷浓度的影响
• 2.3.2.4 共存物质的影响
• 2.3.2.5 标准曲线
• 2.3.3 样品分析
• 2.4 CTMAB- SDBS-BSA 体系共振光散射光谱的研究
• 2.4.1 体系的光谱特征
• 2.4.2 实验条件的优化
• 2.4.2.1 pH 和反应时间的影响
• 2.4.2.2 SDBS 浓度的影响
• 2.4.2.3 CTMAB 浓度的影响
• 2.4.2.4 共存物质的影响
• 2.4.2.5 标准曲线
• 2.4.3 样品分析
• 2.5 小结
• 2.6 参考文献
• 第三章 胶体金与血清白蛋白相互作用的光谱法研究
• 3.1 实验部分
• 3.1.1 仪器与试剂
• 3.1.1.1 仪器
• 3.1.1.2 试剂
• 3.1.2 实验方法
• 3.1.3 仪器参数
• 3.2 结果与讨论
• 3.2.1 胶体金的紫外光谱特征
• 3.2.2 血清白蛋白与胶体金结合的荧光光谱特征
• 3.2.3 荧光猝灭的类型
• 3.2.4 结合常数K 及结合位点数n
• 3.2.5 胶体金与蛋白质的作用力类型
• 3.3 小结
• 3.4 参考文献
• 第四章 不同pH 条件下胶体金与蛋白质相互作用的光谱法研究
• 4.1 实验部分
• 4.1.1 仪器与试剂
• 4.1.1.1 仪器
• 4.1.1.2 试剂
• 4.1.2 实验方法
• 4.1.2.1 胶体金的制备
• 4.1.2.2 Mey 氏试验
• 4.1.3 仪器参数
• 4.2 结果与讨论
• 4.2.1 胶体金和人补体C4 体系的光谱特性
• 4.2.2 聚沉过程的表征
• 4.2.3 凝聚量和人补体C4 浓度之间的关系
• 4.2.4 胶体金与人补体C4 相互作用的可逆性研究
• 4.2.5 用凝聚量确定免疫胶体金中蛋白质的最佳标记量
• 4.2.6 不同pH 条件下胶体金与BSA 和HSA 的相互作用
• 4.3 小结
• 4.4 参考文献
• 第五章 不同pH 条件下曙红Y 与BSA 相互作用的光谱法研究
• 5.1 实验部分
• 5.1.1 仪器与试剂
• 5.1.1.1 仪器
• 5.1.1.2 试剂
• 5.1.2 实验方法
• 5.1.3 仪器参数
• 5.2 结果与讨论
• 5.2.1 体系的光谱特性
• 5.2.2 荧光猝灭的类型
• 5.2.3 结合常数K 及结合位点数n
• 5.2.4 曙红Y 与BSA 相互作用的热力学常数
• 5.2.5 曙红Y 与BSA 间的能量转移
• 5.3 小结
• 5.4 参考文献
• 摘要
• Abstract
• 附录