论文题目: 乳腺成体干细胞体外分离、培养、鉴定及乳腺癌细胞模型的构建
论文类型: 博士论文
论文专业: 外科学
作者: 王英超
导师: 王有德
关键词: 成体干细胞,电离辐射,雌激素,致瘤性
文献来源: 吉林大学
发表年度: 2005
论文摘要: 体外分离、培养、鉴定乳腺成体干细胞,通过电离辐射及雌激素作用诱导细胞发生癌变,从而构建乳腺癌的细胞模型,研究乳腺癌的发病机制。本课题用免疫磁珠的分离方法,从乳腺癌癌旁正常组织中分离了乳腺上皮细胞:腺泡上皮细胞和肌上皮细胞。其中腺泡上皮细胞在体外培养可以向肌上皮细胞转变,可以形成乳腺终末导管结构,通过免疫组化及免疫印记杂交的方法检测其抗原的表达。发现其表达乳腺上皮细胞特异性抗原和细胞角质素19。通过脂质体转染的方法向腺泡上皮细胞内转导SV40,经端粒酶重复序列扩增法检测,细胞表达端粒酶活性,并可以多次传代不死,获得了永生化,通过RT-PCR 及免疫组化的方法未检测C-myc 基因和P53,C-erbB-2 蛋白的表达,细胞的性质无明显变化。腺泡上皮细胞在体外通过电离辐射和雌激素的作用,发生癌变。检测其细胞形态变化,表面标记物,侵袭性,BRCA1和BRCA2基因及在裸鼠体内生长等情况,从而构建乳腺癌的初步细胞模型,为乳腺癌的病因研究,药物治疗奠定基础。
论文目录:
缩写词
前言
一 干细胞研究现状
二 乳腺干细胞的研究及应用进展
三 乳腺癌发病机制研究及基因染色体变异
第一部分 乳腺成体干细胞的分离、培养和鉴定
一 仪器、设备
二 主要试剂及配制
三 实验过程
(一)成体乳腺干细胞分离、培养、筛选
(二)对分离的乳腺上皮细胞(Sepatated human mammary epithelial cell SHMEC)细胞的鉴定
(三)SHMEC 细胞分化
(四)SHMEC 细胞的永生化
(五)永生化 SHMEC 细胞 C-myc 的检测
(六)SP 检测永生化 SHMEC 的 P53 及 c-erbB2 蛋白
四 实验结果
(一)乳腺组织经培养后,形成两类形态不同的细胞
(二)SHMEC 细胞鉴定
(三)SHMEC 细胞分化
(四)SHMEC 细胞的永生化
(五)永生化 SHMEC 细胞经免疫组化检测
(六)永生化 SHMEC 细胞未检测到 C-myc 基因变异,及 P53/C-erbB-2 蛋白表达。
第一部分附图
五 讨论
六 结论
第二部分 乳腺癌细胞模型的构建
一 仪器和设备
二 材料和试剂
三 实验过程
(一) 体外照射腺泡上皮细胞
(二) 雌激素对腺泡上皮细胞生长的影响
(三) 细胞计数和细胞形态的观察
(四) 细胞侵袭性的观察
(五) 辐射后腺泡上皮细胞增殖细胞抗原的检测
(六) RT-PCR对BRCA1和BRCA2基因的检测
(七) 体内实验
四 实验结果
(一) 结 果
(二) 附 图
五 讨 论
六 结论
参考文献
致谢
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英文摘要
发布时间: 2005-08-26
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