论文题目: 可溶性TGF-β1Ⅱ型受体逆转录病毒表达载体的构建及其对外源性TGF-β1拮抗作用
论文类型: 博士论文
论文专业: 内科学
作者: 高巍
导师: 周永兴,聂青和
关键词: 基因,肝纤维化,基因治疗,逆转录病毒载体,细胞凋亡
文献来源: 第四军医大学
发表年度: 2005
论文摘要: 目的:构建表达人TGF-β1Ⅱ型受体细胞外结合区和人IgG1 Fc的融合蛋白逆转录病毒载体,并初步观察了该载体对人正常肝细胞HL-7702的作用,为进一步肝纤维化的基因治疗奠定实验基础。 方法:（1） 以RT-PCR方法扩增目的基因TβRⅡ-IgG1 Fc,扩增产物纯化后克隆至测序载体pGEM-T-Easy,挑取阳性克隆酶切鉴定后测序;利用重组DNA技术,将TβRⅡ-IgG1 Fc基因亚克隆至逆转录病毒载体pLXSN中,重组质粒pL（TβRⅡ-IgG1 Fc）SN在脂质体介导下转染PA317包装细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆,扩大培养,测定病毒滴度;（2） 将重组病毒感染人正常肝细胞HL-7702,G418筛选出抗性克隆,命名为HL/TGF,以PCR对TβRⅡ-IgG1 Fc基因修饰的HL-7702细胞进行鉴定;（3） 将细胞分为空白组、HL/TGF组、TGF-β1组、HL/TGF+TGF-β1组,观察细胞生长曲线,MTT法、流式细胞仪及TUNEL法原位标记凋亡检测观察肝细胞增生和凋亡的变化,应用免疫组化和原位杂交技术观察细胞内TIMPs的变化。
论文目录:
缩略语表
中文摘要
英文摘要
前言和文献回顾
正文
1 可溶性TGF-β_1Ⅱ型受体逆转录病毒表达载体的构建与包装
2 可溶性TGF-β_1Ⅱ型受体逆转录病毒表达载体对HL-7702作用的实验研究
3 可溶性TGF-β_1Ⅱ型受体逆转录病毒表达载体对TIMPs的抑制作用
小结
个人简历和研究成果
致谢
参考文献
发布时间: 2005-07-19
参考文献
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