本文主要研究内容
作者梁诚诚,李文桂（2019）在《铜绿假单胞菌重组质粒pGEX-OprF-I构建、鉴定及其在大肠埃希菌中的表达效率》一文中研究指出：目的构建并鉴定铜绿假单胞菌重组质粒pGEX-OprF-I,观察其在大肠埃希菌中的表达效率。方法以铜绿假单胞菌PA01株的DNA为模板,PCR扩增OprF和OprI抗原编码基因,采用基因拼接法(gene SOEing)剪切OprF和OprI得到OprF-I融合基因,酶切后与表达载体pGEX-1λT连接,构建重组质粒pGEX-OprF-I并转化入大肠埃希菌中,抽提质粒进行双酶切和PCR鉴定。重组菌用异丙硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,采用SDS-PAGE和western blot分析和鉴定表达产物。结果基因拼接法获得1289 bp的OprF-I融合基因;其连接产物经双酶切和PCR鉴定证实该基因成功插入pGEX-1λT中。重组质粒转化DE3后经IPTG诱导,SDS-PAGE检测显示重组菌表达预期约68×10~3的融合蛋白,该蛋白约占菌体总量的18%。Western blot检测Pa感染的鼠血清可特异性识别该融合蛋白。结论成功构建并鉴定了铜绿假单胞菌重组质粒pGEX-OprF-I,转化大肠埃希菌后高效表达OprF-I融合蛋白,该蛋白具有反应原性。
Abstract
mu de gou jian bing jian ding tong lu jia chan bao jun chong zu zhi li pGEX-OprF-I,guan cha ji zai da chang ai xi jun zhong de biao da xiao lv 。fang fa yi tong lu jia chan bao jun PA01zhu de DNAwei mo ban ,PCRkuo zeng OprFhe OprIkang yuan bian ma ji yin ,cai yong ji yin pin jie fa (gene SOEing)jian qie OprFhe OprIde dao OprF-Irong ge ji yin ,mei qie hou yu biao da zai ti pGEX-1λTlian jie ,gou jian chong zu zhi li pGEX-OprF-Ibing zhuai hua ru da chang ai xi jun zhong ,chou di zhi li jin hang shuang mei qie he PCRjian ding 。chong zu jun yong yi bing liu dai -β-D-ban ru tang gan (IPTG)you dao biao da ,cai yong SDS-PAGEhe western blotfen xi he jian ding biao da chan wu 。jie guo ji yin pin jie fa huo de 1289 bpde OprF-Irong ge ji yin ;ji lian jie chan wu jing shuang mei qie he PCRjian ding zheng shi gai ji yin cheng gong cha ru pGEX-1λTzhong 。chong zu zhi li zhuai hua DE3hou jing IPTGyou dao ,SDS-PAGEjian ce xian shi chong zu jun biao da yu ji yao 68×10~3de rong ge dan bai ,gai dan bai yao zhan jun ti zong liang de 18%。Western blotjian ce Pagan ran de shu xie qing ke te yi xing shi bie gai rong ge dan bai 。jie lun cheng gong gou jian bing jian ding le tong lu jia chan bao jun chong zu zhi li pGEX-OprF-I,zhuai hua da chang ai xi jun hou gao xiao biao da OprF-Irong ge dan bai ,gai dan bai ju you fan ying yuan xing 。
论文参考文献
论文详细介绍
论文作者分别是来自中国病原生物学杂志的梁诚诚,李文桂，发表于刊物中国病原生物学杂志2019年05期论文，是一篇关于铜绿假单胞菌论文,重组质粒论文,大肠埃希菌论文,表达效率论文,中国病原生物学杂志2019年05期论文的文章。本文可供学术参考使用，各位学者可以免费参考阅读下载，文章观点不代表本站观点，资料来自中国病原生物学杂志2019年05期论文网站，若本站收录的文献无意侵犯了您的著作版权，请联系我们删除。
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