川芎根腐病病原鉴定、生物学特性和同工酶研究

川芎根腐病病原鉴定、生物学特性和同工酶研究

论文摘要

川芎为伞形科(Umbelliferae)藁本属植物川芎(Ligusticum chuanxiong Hort)的干燥根茎,是著名的川产道地药材,具有近两千年的栽种和使用历史。川芎根腐病[Fusarium solani(Mart) Sacc]是四川省都江堰市川芎种植基地的一种重要病害,2006年,该病田间的发病株率为6.08%~45.47%,平均为23.61%,重病田达68.46%,造成严重危害,已成为该片区川芎上的主要病害。本试验是对川芎根腐病的症状、病原鉴定、生物学特性、室内药剂筛选和田间药剂防治及同工酶活性进行的研究,结果如下:1川芎根腐病的症状川芎根腐病是一种土传病害,在川芎的整个生长期都会发生。发病初期,地上部从外围的叶片开始褪色发黄,并逐渐向心叶扩展。地下块茎的病部初呈褐色至红褐色,部分变为水渍状,随着病情的发展,病株叶尖、叶缘开始焦枯。感病块茎髓部变黑,并且向上发展,褐色渐浅。后期感病块茎内部腐烂,呈黄褐色浆糊状,有特殊臭味,呈软腐状;最后整个植株停止生长、枯死。2川芎根腐病的分离和培养性状经组织分离得到川芎根腐病菌纯培养。所有分离菌株在PDA平板上的形态特征基本一致,2d后出现白色至浅灰色菌丝,3d后开始产孢,菌丝有隔,絮状,菌落正面有同心轮纹,菌落反面呈淡紫色。3分离菌的回接与病原鉴定在室温条件下,用分生孢子悬浮液浸根接种川芎的根部,回接植株15d后全部发病,症状与田间症状相同,而CK不发病。从发病的部位进行常规分离再次分离到相同的病菌。由此证明该分离菌是川芎根腐病的病原菌。根据病原菌的形态特征、培养性状观察和rDNA-ITS的序列分析。参照张中义等《植物病原真菌学》和Booth的镰刀菌分类系统,将该病原菌鉴定为茄腐镰孢菌[Fusarium solani(Mart)Sacc],属于半知菌亚门(Deuteromycotina)、丝孢纲(Hyphomycetes),瘤座孢目(Tuberculariales),瘤座孢科(Tuberculariaceae),,镰刀菌属(Fusarium)。由[Fusarium solani(Mart)Sacc]引起的川芎根腐病是国内外首次报道。4川芎根腐病菌的生物学特性本研究明确了不同培养基、碳源、氮源、温度、pH值以及光照等对川芎根腐病菌菌丝生长、产孢以及分生孢子萌发的影响。在不同的培养基中,病原菌在PSA上菌丝生长和产孢最好;可溶性淀粉培养基上菌丝生长最差;在PS培养基上产孢最差;温度在25~30℃间适于菌丝的生长,最适温28℃,低于10℃或高于40℃均会对孢子产生及萌发产生抑制作用,高温会造成孢子畸形;pH 5~8之间适于病原菌的生长,最适生长pH6,pH过低或过高均会造成对病原菌生长的影响;不同光照条件处理表明:各处理对菌丝生长和产孢的影响无显著性差异;菌丝生长最适碳源为蔗糖,产孢最适碳源为果糖,乳糖最差;菌丝生长在硝酸钾上生长最好,在硫酸铵生长最差,牛肉膏产孢最好,氯化铵产孢最差。分生孢子萌发适温20℃~35℃;最适28℃,RH从90%~100%和水滴中均可萌发,水滴最好,低于90%不萌发;适宜pH 5~7,最好pH6,萌发率71.73%,高于pH 8不萌发;分生孢子致死温度为53℃。5室内药剂筛选和田间药剂防治8种药剂(根腐菌、卡菌丹、根必治、甲基托布津、代森锰锌、百菌清、敌克松一号、地菌统克)筛选结果表明,对病原菌菌丝生长和产孢抑制效果最好的是根必治、甲基托布津,达到极显著水平(菌落直径为2.20cm和1.75cm,产孢量为0.92×107个/皿和0.68×107个/皿);百菌清和根腐灵对病原菌的抑制次之(菌落直径为2.93cm和3.30cm,产孢量为0.52×107个/皿和1.8×107个/皿);敌克松一号和卡菌丹对病原菌无抑制作用。对病原菌分生孢子萌发抑制效果最好的是百菌清、代森锰锌,抑制萌发率达到100%;根必治、地菌统克、根腐灵次之,抑制萌发率分别为99.8%、99.5%和98.7%;敌克松一号和卡菌丹对分生孢子萌发抑制较差,仅为30.4%和14.6%。选用4种药剂进行田间药效试验,药剂防治试验表明:百菌清、代森锰锌、甲基托布津和根必治的病株率和防效均达到极显著水平。6茄腐镰刀菌对川芎同工酶活性的影响同工酶试验表明:接种后,POD酶活性表现为先上升而后下降的趋势,在接种后第7 d时达到最大值,峰值为274.335,为对照的5.43倍,而后缓慢下降,到第12 d时下降到对照的水平,而对照的变化一直较为平稳。PPO酶活性表现为先上升而后下降的趋势,在接种后第4d时活性开始增大,到第7 d时,峰值为为对照的2.82倍,而后缓慢下降,到第9 d达到最大值出现第二个峰值,为76,而后逐渐下降,到第12 d时下降到对照的水平,而对照的变化一直较为平稳。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 目录
  • 第一部分 文献综述
  • 1 川芎概况
  • 1.1 川芎的基本特征
  • 1.2 川芎的化学成分
  • 1.3 川芎的药用价值
  • 1.4 川芎的其他价值
  • 1.4.1 美容美发
  • 1.4.2 杀螨剂
  • 1.4.3 饲料添加剂、烟用香料添加剂
  • 1.4.4 天然防腐剂
  • 1.5 川芎的主要病虫害
  • 2 川芎的根腐病研究
  • 2.1 川芎根腐病危害症状
  • 2.2 病原菌
  • 2.2.1 病原菌分类地位
  • 2.2.2 病原菌的分布
  • 2.2.3 茄腐镰孢菌[Fusarium solani(Mart)Sacc]形态特点
  • 3 ITS序列分析及在真菌研究上的应用
  • 3.1 核酸序列分析
  • 3.2 ITS序列分析的原理
  • 3.3 ITS区的特点
  • 3.4 ITS序列分析在真菌分类鉴定上的应用
  • 4 病害循环
  • 4.1 侵染源
  • 4.2 病原菌在寄主组织内的侵染和扩展
  • 5 根腐病的防治
  • 5.1 化学防治
  • 5.2 农业防治
  • 6 同工酶在植物抗病性鉴定上的应用研究
  • 6.1 同工酶活性变化与植物抗病性的关系
  • 6.2 过氧化物酶(PPO)
  • 6.3 多酚氧化物酶(PPO)
  • 第二部分 材料与方法
  • 1 症状观察症状及发病率、严重度
  • 1.1 病原菌的分离和回接
  • 1.1.1 病原菌的分离
  • 1.1.2 分离菌回接
  • 1.2 培养性状及形态学鉴定
  • 1.3 分子生物学鉴定
  • 1.3.1 病原菌来源
  • 1.3.2 引物
  • 1.3.3 主要试剂的配制
  • 1.3.4 丝状真菌DNA提取方法(CTAB法)
  • 1.3.5 PCR扩增
  • 2 生物学特性
  • 2.1 不同培养基对菌丝生长及产孢的影响
  • 2.2 温度对病原菌菌丝生长和产孢的影响
  • 2.3 PH值对病原菌菌丝生长和产孢的影响
  • 2.4 光照对病原菌菌丝生长和产孢的影响
  • 2.5 碳、氮源对病原菌菌丝生长和产孢的影响
  • 2.5.1 碳源对病原菌菌丝生长和产孢的影响
  • 2.5.2 氮源对病原菌菌丝生长和产孢的影响
  • 2.6 pH值、湿度、温度、光照、碳氮源对分生孢子萌发的影响
  • 2.6.1 pH值对分生孢子萌发的影响
  • 2.6.2 湿度对分生孢子萌发的影响
  • 2.7 温度对分生孢子萌发的影响
  • 2.8 光照对分生孢子萌发的影响
  • 2.9 分生孢子致死温度测定
  • 3 室内药剂筛选和田间药剂防治
  • 3.1 室内药剂筛选
  • 3.1.1 药剂对菌落生长和产孢的影响
  • 3.1.2 药剂对孢子萌发的影响
  • 3.2 田间药剂防治
  • 4 茄腐镰刀菌对川芎同工酶活性的影响
  • 4.1 接种取样:
  • 4.2 实验药品:
  • 4.3 溶液配制:
  • 4.4 仪器:
  • 4.5 试验方法:
  • 4.5.1 酶液的提取:
  • 4.5.2 POD酶活性的测定:
  • 4.5.3 PPO酶活性的测定:
  • 第三部分 结果与分析
  • 1 症状与病原菌的分离鉴定
  • 1.1 症状及发病率、严重度
  • 1.2 病原菌的分离和回接
  • 1.3 病原菌鉴定
  • 1.3.1 形态鉴定
  • 1.4 PCR扩增结果
  • 2 生物学特性
  • 2.1 不同培养基对菌丝生长及产孢的影响
  • 2.2 温度对菌丝生长及产孢的影响
  • 2.3 pH值对菌丝生长及产孢的影响
  • 2.4 不同光照条件对菌丝生长及产孢的影响
  • 2.5 碳、氮源对病原菌菌丝生长和产孢的影响
  • 2.5.1 碳源对菌丝生长及产孢的影响
  • 2.5.2 氮源对菌丝生长及产孢的影响
  • 2.6 温度、湿度、pH值对孢子萌发的影响
  • 2.7 分生孢子致死温度
  • 3 室内药剂筛选和田间药剂防治
  • 3.1 室内药剂筛选
  • 3.1.1 药剂对菌落生长和产孢的影响
  • 3.1.2 药剂对孢子萌发的影响
  • 3.2 田间药剂防治
  • 4 茄腐镰刀菌对川芎同工酶变化的影响
  • 4.1 过氧化物酶(POD)活性变化
  • 4.2 多酚氧化酶(PPO)活性变化
  • 第四部分 结论与讨论
  • 1 川芎根腐病的症状
  • 2 川芎根腐病菌的分离与鉴定
  • 3 川芎根腐病菌的生物学特性
  • 4 室内药剂筛选和田间药剂防治
  • 5 茄腐镰刀菌对川芎同工酶活性的影响
  • 参考文献
  • 致谢
  • 攻读硕士期间发表的学术论文目录
  • 相关论文文献

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