可缓释血管内皮生长因子的聚乳酸一聚乙醇酸支架及与血管平滑肌细胞的细胞相容性研究

论文摘要

实验背景及目的目前组织工程产物已经在皮肤、骨的修复重建等领域开始了临床应用,而血管组织工程的目标就是构建有生物活性的、能够用于临床治疗的血管移植物。目前国内外已经进行了较多的研究以期研制出无免疫原性,抗血栓形成、组织和细胞相容性高,具有一定强度和生长性并能广泛应用于临床的血管替代物,以期解决临床上治疗血管狭窄或闭塞导致的缺血性疾病自体血管移植及血管来源有限的问题。组织工程血管大规模用于临床,必须找到一种快速,精确,廉价设计加工支架的方法。目前快速成型技术的成熟无疑给我们带来了希望。快速成型技术（Rapid prototyping,RP）最早出现于1986年并首先应用于航天工业,1992年,考虑到利用RP技术可制备微观结构可调的物件,Cima等首次尝试将快速成型技术应用于具有药物释放功能的聚丙交酯支架的制备,开创了利用RP技术制备组织工程支架的先河。聚乳酸一聚乙醇酸（PLGA）是目前最常采用的组织工程血管支架材料之一,制备可缓释血管内皮生长因子（VEGF）的可降解聚乳酸一聚乙醇酸（PLGA）支架（VEGF-PLGA）的方法简便可行。有研究提示缓释微球载体可使半衰期较短的生长因子长期持续释放。而以明胶微球作为缓释载体,加载VEGF和PLGA复合构建组织工程血管支架方面的研究还很少。本实验旨在探讨一种可缓释血管内皮生长因子（VEGF）的可降解聚乳酸一聚乙醇酸（PLGA）支架的制备方法以及与血管平滑肌细胞（SMC）的细胞相容性,为具生物活性的组织工程血管支架的应用研究提供依据。实验方法第一部分:可缓释血管内皮生长因子的可降解聚乳酸-聚乙醇酸支架的构建。以明胶微球作为缓释载体,加载VEGF和PLGA复合构建组织工程血管支架（VEGF-PLGA）并考察体外释放效果。第二部分:平滑肌细胞的培养和鉴定以及它和VEGF-PLGA的相容性研究。体外培养的大鼠肺主动脉第5代或第6代SMC细胞分为三组:可缓释血管内皮生长因子的可降解聚乳酸-聚乙醇酸（VEGF-PLGA）组、聚乳酸-聚乙醇酸（PLGA）组与对照组。分别种植在VEGF-PLGA膜片上,PLGA膜片上,对照组不放置膜片。用相差显微镜观察细胞的生长情况,绘制细胞生长曲线,检测细胞毒力和细胞黏附率,并用流式细胞仪检测细胞周期分布。实验结果1、VEGF在体外释放达14天以上。2、SMC在VEGF-PLGA膜片上生长良好。3、MTT法检测细胞在VEGF-PLGA的增殖情况显示,明显好于其它组（P<0.05）,细胞增殖符合细胞生长曲线。4、细胞黏附率和流式细胞仪检测结果显示,三组无明显差异（P>0.05）,VEGF-PLGA对血管平滑肌细胞有良好的相容性。结论明胶微球载体制备工艺简便,性能优良,VEGF-PLGA制备方法简便易行,可在较长时间内持续释放活性VEGF,对血管平滑肌细胞具有良好的相容性,可以用于组织工程血管的进一步构建。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 文献回顾
• 正文
• 实验一：可缓释血管内皮生长因子的可降解聚乳酸-聚乙醇酸支架的构建
• 1. 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 实验二：平滑肌细胞的培养、鉴定以及其和VEGF-PLGA的相容性研究
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 小结
• 参考文献
• 个人简历和研究成果
• 攻读学位期间发表的论文
• 致谢