利用植物凝集素作为胰腺干/祖细胞负向筛选标志性分子研究

论文摘要

糖尿病是当代医学三大难症之一。学者们一直希望通过研究胰腺发育和胰腺干/祖细胞来获得可以被诱导产生新p细胞的胰腺干/祖细胞。迄今,由于无法准确定位这些潜在的胰腺干/祖细胞,因此对胰腺干/祖细胞的增殖和分化特性的研究进展极为缓慢。凝集素是一种非免疫来源且能够与细胞膜上的糖及其缀合物可逆专一性结合的蛋白质,广泛存在于动植物及微生物中,因其能够凝集红细胞因而又称为血凝素。植物凝集素能特异地识别细胞膜上的糖蛋白或糖肽上的碳脂化合物决定簇,且一种凝集素仅专一性地与细胞膜上的某种特异性糖基结合,因而可以作为研究细胞标志性分子,及细胞与分子之间相互作用的重要依据。本研究应用荧光组织化学方法对4种植物凝集素（PNA、PHA、BS、DBA）在正常成体小鼠胰腺、胚胎胰腺及切除后再生胰腺组织中进行了化学及荧光组织化学检测来筛选胰腺干/祖细胞的标志性分子,并得到如下结论：（1）PNA、PHA、BS都能够标记胰腺的腺泡细胞,但不能标记胰腺的导管和胰岛细胞；（2）相对于植物凝集素PHA和BS来说,PNA不标记胚胎期的胰腺干/祖细,但对分化期的胰腺细胞能够较好的标记,因而PNA更适合于作为流式细胞筛选的负向筛选标志分子；（3）PNA可以与细胞世系分子Factor-8或Sca-1共同使用,在胰腺干/祖细胞筛选时排除血管内皮细胞的干扰：（4）植物凝集素DBA能够特异性的与小鼠胰腺导管上皮细胞结合,因而DBA可以与PNA联合使用来作为胰腺干/祖细胞筛选的负向筛选分子去除已经分化的腺泡细胞和导管细胞：（5）HSA能特异标记胰腺腺泡细胞、导管细胞及血管内皮细胞,可以与PNA协同使用作为胰腺干/祖细胞筛选的负向筛选分子。以上研究结果对于胰腺干/祖细胞分离、鉴定和纯化研究具有参考价值,并且对于小鼠胰腺中的特定细胞类型鉴定和分离具有重要意义。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 绪论
• 1.1 胰腺干/祖细胞标记物研究进展
• 1.1.1 胰腺概述
• 1.1.2 胰腺干/祖细胞筛选研究进展
• 1.1.3 胰腺干/祖细胞标志性分子
• 1.2 凝集素研究进展
• 1.2.1 植物凝集素概述
• 1.2.2 PNA（花生凝集素）
• 1.2.3 PHA（菜豆凝集素）
• 1.2.4 BS（叶豆凝集素）
• 1.2.5 DBA（双花扁豆凝集素）
• 1.3 本研究的日的及意义
• 2 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 试验动物
• 2.1.2 试验试剂
• 2.1.3 主要仪器设备
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 主要试验器械的清洗和消毒
• 2.2.2 试验药品的配置
• 2.2.3 试验动物取材
• 2.2.4 试验动物手术
• 2.2.5 冰冻切片
• 2.2.6 荧光组织化学
• 2.2.7 免疫组织化学染色
• 2.2.8 观察记录与数据统计
• 3 试验结果
• 3.1 植物凝集对小鼠胚胎时期的胰腺细胞标记研究
• 3.1.1 PNA在小鼠胚胎时期胰腺中的研究
• 3.1.2 PHA在小鼠胚胎时期胰腺中的研究
• 3.2 植物凝集对小鼠成体时期的胰腺细胞标记研究
• 3.2.1 PNA在成体小鼠胰腺中的研究
• 3.2.2 PHA在成体小鼠胰腺中的研究
• 3.2.3 BS在成体小鼠胰腺中的研究
• 3.2.4 DBA在成体小鼠胰腺中的研究
• 3.2.5 HSA在成体小鼠胰腺中的研究
• 3.3 植物凝集在小鼠胚胎胰腺中与其它胰腺标志性分子共染
• 3.3.1 植物凝集素PNA与细胞表面分子HSA在小鼠胚胎时期胰腺中的研究
• 3.3.2 植物凝集素PNA与PHA在小鼠胚胎时期胰腺中的研究
• 3.4 植物凝集在小鼠成体胰腺中与其它胰腺标志性分子共染
• 3.4.1 PNA与一些细胞世系标志性分子在成体小鼠胰腺中共染研究
• 3.4.2 PNA与HSA及PHA在成体小鼠胰腺中共染研究
• 4 讨论
• 4.1 植物凝集素在正常小鼠胰腺中的研究
• 4.2 植物凝集素在损伤再生的小鼠胰腺中的研究
• 5 结论
• 参考文献
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 致谢