表皮干细胞构建组织工程皮肤的初步研究

论文摘要

目的:应用Ⅳ型胶原粘附法分选表皮干细胞（ESC）,对分选的细胞进行培养、鉴定,并应用分选的ESC 作为种子细胞构建复方壳多糖组织工程皮肤的表皮,为研究ESC 的多向分化潜能和分化标志提供良好的实验模型,并力求获得生物学性能更佳的组织工程皮肤,为临床应用提供更理想的生物修复材料。应用基因转染技术以绿色荧光蛋白（GFP）对种子细胞进行标记,为研究组织工程皮肤种子细胞的存活情况和基因修饰打下基础。方法:对酶消化分离获得的表皮细胞,应用Ⅳ型胶原快速粘附法进行分选,并以角质细胞无血清培养基（K-SFM）进行培养,观察细胞生长状况及克隆形成情况;选择ESC 相对特异性标记分子β1 整合素、角蛋白19（CK19）的单/多克隆抗体,用免疫组化法对分选后的各组细胞进行鉴定;选择HMB45、S-100 特异表达作为标记物,鉴定分选所得细胞及组织工程皮肤中黑色素细胞（MC）存在及含量;在培养的种子细胞中分别转染GFP,观察转染的成功率,并应用转染后的细胞构建组织工程皮肤,观察组织工程皮肤在培养过程中GFP 的表达情况;对比研究ESC 作为种子细胞与未分选的表皮细胞作为种子细胞构建的组织工程皮肤的组织结构特性的差异。结果:1.利用ESC 对细胞外基质（ECM）的高粘附力,可以初步筛选ESC;所分选的细胞体外培养可形成明显的克隆;以0.2mg/ml 浓度粘附15 分钟组,β1 整合素、CK19 双标阳性的细胞占28.50%。2.Ⅳ型胶原快速粘附法分选的细胞中含有较多的MC,MC 在K-SFM 培养基中可以继续生长并增殖,分选的细胞培养14 天后作为种子细胞所构建的组织工程皮肤中仍然含有较多的MC。3.对种子细胞进行了成功转染GFP,阳性率较高,构建的组织工程皮肤中仍然可以观察到GFP 的表达。4.经分选的ESC 构建出来的组织工程皮肤,表皮生长较对照组好,表皮颜色较深,组织切片见其表皮层更厚,表皮结构更完善,表皮与真皮的结合更加紧密。结论:1.Ⅳ型胶原快速粘附法是一种初步分选ESC 的较好方法,可以得到含较高比例ESC 的增殖活力好的表皮种子细胞;2.分选所得的细胞培养后其中仍然含有

论文目录

• 英文缩写
• 英文摘要
• 中文摘要
• 论文正文 表皮干细胞构建组织工程皮肤的初步研究
• 前言
• 基本材料及基础培养液和试剂的配制
• 实验一、表皮于细胞的分选鉴定及体外培养
• 参考文献
• 实验二、培养的细胞中及构建的组织工程皮肷中黑色素细胞的鉴定
• 参考文献
• 实验三、绿包荧光蛋白标记组织工程皮肤种子细胞的研究
• 参考文献
• 实验四、表皮=F 细胞在组织工程皮肤构建中的应片J 仞步研究
• 参考文献
• 全文结论
• 致谢
• 照片
• 文献综述一 表皮干细胞的应用研究近况
• 参考文献
• 文献综述二 基因工程技术在皮肤组织工程中的应
• 参考文献
• 在读期间发表文章