论文摘要
白介素-15（Interleukin 15，IL-15）是四螺旋束细胞因子家族的一员，具有T细胞生长因子活性。IL-15在先天性和适应性免疫细胞的动态平衡，特别是NK细胞和CD8+记忆细胞的发育中具有重要作用。在慢性病毒感染，比如丙型肝炎病毒感染中，IL-15可能在特殊免疫反应的刺激中起作用。土拨鼠（woodchuck）模型是肝DNA病毒感染和治疗性干涉的可用动物模型。本研究中利用不同的表达系统将wIL-15蛋白在原核细胞和昆虫细胞中表达，并将得到的纯化蛋白作用于小鼠脾细胞，研究其对小鼠脾细胞增值的影响。丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus，HCV）是输血后及散在性的非甲非乙型肝炎（Non-A，Non-B Hepatitis，NANBH）的主要病因。近期，一些研究组织报道的HCV体外培养体系使HCV的基础研究得到长足发展。为了建立HCV中国株的感染性克隆，本研究分离并克隆了HCV-Hubei株cDNA基因组。本文分为三个章节第一章对HCV及HBV的发现、基因组结构和基因型的特点和分布、检测手段、治疗方法等做了简要综述。并对wIL-15基因的功能及蛋白表达系统进行简要介绍。第二章使用p-MAL表达系统和Bac-to-Bac系统将wIL-15蛋白在原核细胞和昆虫细胞中进行表达。通过离子交换层析柱法纯化得到55 kDa的MBP-wIL-15蛋白，并用Factor Xa切除MBP标签蛋白。分别将切除前后的蛋白作用于小鼠脾细胞，均未见有促进细胞增殖的作用。真核表达的蛋白因有翻译后修饰过程，分子量大于理论值，为18 kDa。第三章描述了HCV-Hubei株全基因组克隆的构建，测序分析所克隆HCV—Hubei株的基因组全长为9405 nt（GenBank accession number：EF638081），属于HCV 1b亚型，亲缘关系与同为中国分离株的HCV—shanghai（AY460204）最为接近。目前为止已将全长cDNA克隆到3个大片段质粒上，分别为3 kb，4.9 kb和2 kb。分析得出，全基因组含有一个8952 nt开放阅读框，编码一个2864 aa的多肽。