论文摘要
支气管哮喘是常见的呼吸系统疾病,随着社会工业化程度的提高,大气污染的加重,全球发病率成上升趋势。β2受体激动剂作为传统的治疗哮喘的药物,其机制主要是作用于呼吸道的β2受体,激活腺苷酸环化酶,使细胞内的环磷腺苷(cAMP)含量增加,游离Ca2+减少,从而松弛支气管平滑肌。并可通过抑制肥大细胞等致敏细胞释放过敏反应介质,解除支气管痉挛。我们设想β2受体激动剂是否会是通过肺部树突状细胞来起作用的?故本实验应用β2受体激动治疗哮喘小鼠模型来观察树突状细胞(DC)功能的变化。研究目的:通过研究β2受体激动剂(沙丁胺醇)对哮喘小鼠肺脏DC表面分子表达的变化及其对T淋巴细胞增殖、分化能力诱导的影响来验证沙丁胺醇治疗哮喘的作用,并分析此作用可能是通过肺部DC来实现的。研究方法:将80只4-6周龄雌性健康BALB/C小鼠按随机数字表法分为5组,分别称为沙丁胺醇组,地塞米松组,沙丁胺醇+地塞米松组,生理盐水组和正常对照组,每组16只。正常对照组不做任何处理,仅正常饲养。按照我们以往方法成功建立哮喘模型后,对前四组小鼠分别以不同的药物(硫酸沙丁胺醇,地塞米松,硫酸沙丁胺醇+地塞米松,生理盐水)雾化吸入进行治疗。于末次雾化治疗24 h后各组小鼠取4只麻醉后结扎右下肺叶,然后行余肺支气管肺泡灌洗(BAL),回收得支气管肺泡灌洗液(BALF)离心、留上清作IL-4、IL-5测定。后剪下已结扎的右下肺叶浸入4%多聚甲醛中固定24小时,以备病理切片用。余下每组12只小鼠摘除眼球取血并离心分离血清,用ELISA法进行检测血清中HRP-IgEmAb水平。用胶原酶Ⅱ消化肺组织,运用免疫磁珠法分离肺脏DC,采用流式细胞仪检测DC表面分子CD80、CD86、MHCⅡ类分子表达,最后以各组小鼠肺脏DC和D011.10(OVA特异性转基因小鼠)脾脏T淋巴细胞共培养3天后用ELISA法测量上清中细胞因子IL-4、IL-5的水平以及用3H-TdR掺入法检测T淋巴细胞增殖反应。结果:1、生理盐水组小鼠肺脏H-E染色可见大量炎细胞浸润、杯状细胞增生及支气管平滑肌增厚,其它四组不明显。2、四组哮喘小鼠血清IgE水平均增高,且生理盐水组增高更明显,正常对照组小鼠IgE很低。3、生理盐水组小鼠肺泡灌洗液IL-4、IL-5水平测定较其它四组增高明显。4、生理盐水组小鼠肺脏DC表面分子CD80、CD86、MHCⅡ表达较其它组上调。5、四组哮喘小鼠肺脏DC和T淋巴细胞共培养后T淋巴细胞均有增殖,生理盐水组较其它三组增高明显,正常对照组无增殖反应。6、生理盐水组小鼠肺脏DC和T淋巴细胞共培养后上清IL-4、IL-5水平较其它四组增高明显。结论:1、沙丁胺醇可以改善支气管哮喘的病理改变。2、沙丁胺醇可以下调支气管哮喘小鼠肺脏DC的CD80、CD86和MHCⅡ表面分子的表达。3、沙丁胺醇可以抑制支气管哮喘小鼠肺脏DC刺激T淋巴细胞的增殖能力。4、沙丁胺醇可以抑制Th2细胞因子(IL-4、IL-5)的产生,其抑制免疫应答反应向Th2方向偏移可能是通过肺部DC来实现的。
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