论文摘要
目的:大量的文献报道已经证实了内分泌激素——催乳素（prolactin,PRL）在机体免疫应答中的调控作用,但是T淋巴细胞自分泌的催乳素的免疫调控作用至今不清楚。为了研究这种自分泌催乳素在被激活的T淋巴细胞中的作用,我们构建了慢病毒介导的RNA干扰技术敲除了催乳素受体（prolactin receptor,PRLR）的T淋巴细胞模型并以PHA刺激活化后检测其免疫效应的变化。本研究有三个目的:1.设计、构建慢病毒介导的RNA干扰技术敲除了PRLR的Jurkat细胞模型;2.利用上述细胞模型,探讨沉默PRLR基因的表达而阻断自分泌PRL的作用后对T淋巴细胞增殖的影响及其分子机制;3.进一步探讨自分泌PRL对Th1/Th2细胞因子平衡偏离和调节性细胞因子IL-10的影响。方法:1.按照小分子RNA干扰的设计原则和表达载体的要求,设计构建PRLR特异性的慢病毒RNA干扰重组体,并进行酶切鉴定及基因测序;包装慢病毒并测定其滴度;2.体外培养人淋巴白血病T细胞株Jurkat细胞,进行不同滴度的重组慢病毒感染,通过荧光显微镜观察重组慢病毒感染Jurkat细胞的情况;应用western blot检测PRLR基因沉默效果,确认慢病毒介导的RNA干扰技术敲除了催乳素受体的Jurkat细胞模型构建成功;3.用Nb2淋巴细胞生物测定法检测催乳素受体敲除的Jurkat细胞自分泌催乳素的水平;4. MTT比色法联合细胞计数检测PHA刺激Jurkat细胞模型后的增殖情况,应用western blot检测与PRL刺激Jurat细胞增殖相关的抗凋亡蛋白Bcl-2的表达情况;5.流式细胞仪检测PHA刺激Jurkat细胞模型后协同刺激分子CD28、CD154和CD137的表达变化;6.应用双抗体夹心ELISA检测PHA刺激Jurkat细胞模型后上清液中细胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ和IL-10的变化。结果:1.构建的PRLR特异性的慢病毒RNA干扰重组体经酶切鉴定、基因序列测序,结果与设计序列完全相同,慢病毒重组体构建成功;2.慢病毒包装并测定浓度后感染Jurkat细胞,感染168h后收集细胞进行western blot检测,结果显示靶蛋白被明显抑制,催乳素受体敲除的Jurkat细胞模型构建成功;3.Nb2淋巴细胞生物检测法测定自分泌的催乳素水平有较高的敏感性和特异性,用这种方法检测出催乳素受体敲除的Jurkat细胞自分泌的催乳素水平比对照组和空载体组高;4.催乳素受体敲除的Jurkat细胞受PHA刺激后增殖反应明显下降,其分子机制是抗凋亡蛋白Bcl-2的下调;5.以PHA刺激敲除了催乳素受体的Jurkat细胞模型后,与对照组比较,协同刺激分子CD154、CD137的表达下调（P<0.05）,而CD28的表达不受影响;6.与对照组比较,细胞因子IL-2、IL-4的表达下调（P<0.05）,而IFN-γ和IL-10的表达不受影响。结论:1.构建的PRLR特异性慢病毒介导的RNA干扰能够在Jurkat细胞中保留较长时间的RNA干扰,阻断了自分泌催乳素对Jurkat细胞的作用;构建的这种细胞模型是研究自分泌催乳素作用于T淋巴细胞的一种很好的工具; 2.Jurkat细胞的催乳素受体敲除后自分泌的催乳素水平上调,表明PRLR对自分泌的PRL存在负反馈调节作用;3.自分泌PRL在维持淋巴细胞增殖起共辅助因子的作用,这种作用的机制是它可以通过PRL/PRLR信号转导途径调节抗凋亡蛋白Bcl-2的表达; 4.自分泌PRL通过调节协同刺激分子和细胞因子的表达来影响T淋巴细胞的免疫应答;5.自分泌PRL调节Th1和Th2淋巴细胞的平衡,对调节性细胞因子IL-10的表达没有影响;6.T淋巴细胞周围微环境中自分泌的催乳素对T淋巴细胞的增殖和对PHA刺激的免疫应答起重要的调控作用。
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- [1].地西他滨诱导人急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡机制的研究[J]. 中国现代医生 2020(01)
- [2].姜黄素诱导Jurkat细胞凋亡的机制[J]. 吉林医药学院学报 2017(05)
- [3].夏枯草提取物作用Jurkat细胞的分子生物学研究[J]. 中药材 2014(08)
- [4].七叶皂苷钠抑制人白血病Jurkat细胞增殖的机制研究[J]. 中草药 2012(01)
- [5].姜黄素对Jurkat细胞增殖及凋亡的影响[J]. 中国民康医学 2014(21)
- [6].冬凌草甲素及联合柔红霉素对jurkat细胞增殖抑制作用的观察[J]. 中华肿瘤防治杂志 2012(16)
- [7].正常骨髓基质细胞促进残留耐药Jurkat细胞凋亡的研究[J]. 解放军医学杂志 2011(02)
- [8].螺内酯诱导人急性白血病细胞Jurkat凋亡的作用研究[J]. 实用药物与临床 2014(04)
- [9].川芎嗪对白血病细胞Jurkat粘附、运动和侵袭的影响[J]. 重庆医科大学学报 2008(04)
- [10].雷公藤甲素对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖和凋亡的影响[J]. 中国实验血液学杂志 2008(03)
- [11].苦参碱对白血病细胞株Jurkat侵袭转移的影响[J]. 中国中西医结合杂志 2008(10)
- [12].熊果酸诱导Jurkat细胞凋亡及其作用机制的研究[J]. 中国实验血液学杂志 2014(02)
- [13].阿司匹林对Jurkat细胞体外作用的实验研究[J]. 临床血液学杂志 2008(01)
- [14].催乳素在Jurkat细胞中信号传导分子的蛋白质组分析[J]. 中国免疫学杂志 2008(08)
- [15].催乳素刺激Jurkat细胞热休克蛋白90的表达及地塞米松的干预作用[J]. 中国免疫学杂志 2008(10)
- [16].大蒜素对重组质粒转染后Jurkat细胞周期和凋亡的影响[J]. 现代肿瘤医学 2017(17)
- [17].丙戊酸钠对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株增殖及凋亡的影响[J]. 中国实验血液学杂志 2013(02)
- [18].乌索酸诱导Jurkat细胞凋亡及其机制的初步研究[J]. 中国实验血液学杂志 2010(01)
- [19].阿奇霉素诱导淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡作用的研究[J]. 临床血液学杂志 2009(06)
- [20].二甲基亚砜直接加入培养中Jurkat细胞进行冻存[J]. 华夏医学 2016(03)
- [21].低浓度哇巴因对人白血病细胞株Jurkat的生长调控作用及其分子机制初步研究[J]. 现代生物医学进展 2012(13)
- [22].二氟甲基鸟氨酸对T淋巴瘤Jurkat细胞生长的影响[J]. 第三军医大学学报 2010(06)
- [23].应用原子力显微镜分析正常淋巴细胞和Jurkat细胞的形态和机械性质[J]. 生物工程学报 2009(07)
- [24].应用流式细胞仪研究阿非迪霉素对Jurkat细胞凋亡的影响[J]. 中国畜牧兽医 2014(06)
- [25].哇巴因对T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株的作用及机制的初步探讨[J]. 医学研究生学报 2014(07)
- [26].三羟基苯甲酸纯化物及其化合物对Jurkat细胞周期进程及凋亡的影响[J]. 吉林大学学报(医学版) 2010(05)
- [27].毛兰素对急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞体外增殖和凋亡影响[J]. 中华肿瘤防治杂志 2020(16)
- [28].阿霉素干预对miR-106a在淋巴瘤Jurkat细胞中表达的影响[J]. 基因组学与应用生物学 2017(07)
- [29].冬凌草甲素通过下调Brg1表达抑制Jurkat细胞生长[J]. 中国当代儿科杂志 2017(11)
- [30].雷公藤红素对白血病HL-60和Jurkat细胞增殖及凋亡的影响[J]. 中国药科大学学报 2015(01)