变应性鼻炎患者转录因子T-bet的表达特征及其对尘螨变应原体内外刺激的反应

论文摘要

背景CD4辅助性T细胞的分化与疾病的关系是近年来的研究热点。T细胞表现为功能上的异质性,在不同的细胞因子、抗原呈递细胞及抗原等因素的作用下,Th0前体细胞选择性地向Th1或Th2细胞分化。Th1/Th2分化与多种疾病有关,如肿瘤患者出现典型的Th2漂移,哮喘等变态反应性疾病表现Th2型,校正Th1/Th2细胞平衡,可为疾病的免疫治疗提供新的手段。T-bet主要表达于CD4辅助性T淋巴细胞,是Th1特异性相关转录因子,因在Th1/Th2分化中起着关键性的作用而越来越受到关注。在无致敏原刺激的情况下,T-bet单独缺陷就能使小鼠引起气道炎症反应。其一是因为Th2型细胞及细胞因子失去了T-bet的抑制后过量表达;其二是T-bet的表达缺陷导致Th1分化减少和Th1相关细胞因子减少,这也就导致Th2型细胞及细胞因子相对增多。T-bet介导细胞因子和己极化的Th2细胞变化,可能为治疗过敏性疾病提供了条件。Th特异性相关转录因子对细胞因子平衡有重要影响,但是对细胞因子以后的一些事件的作用还不清楚。比如关于转录因子与CD23、嗜酸细胞阳离子蛋白（eosinophile cationic protein ECP）的关系还不清楚。变应原诱导刺激对变态反应性疾病患者转录因子的作用研究还很肤浅。变应性鼻炎（allergic rhinitis AR）患者扁桃体、腺样体和鼻黏膜中淋巴组织等鼻咽相关淋巴组织（nasopharyngeal-associated lymphoid tissues NALT）的T细胞相关转录因子表达情况有待研究。研究变应性鼻炎患者外周血和呼吸道黏膜淋巴组织T细胞分化相关转录因子对从系统免疫和局部黏膜免疫方面探讨其发生机制有着重要意义。本研究的着眼点是通过体内外变应原的刺激,了解变应性鼻炎患者外周血中Th1特异性相关转录因子T-bet、CD23、ECP的变化和它们之间的相互关系。用免疫组化染色法了解AR患者NALT中的T-bet表达特征和意义。目的探讨AR患者外周血单核细胞（peripheral blood monouclear cells PBMC）中转录因子T-bet表达及其与CD23、ECP以及过敏症状评分的关系;了解AR患者经体内外尘螨变应原刺激后T-bet表达、CD23、ECP和过敏症状变化;同时了解T-bet在有AR和没有AR的两组人群的NALT中的表达特征和意义。方法采取15例健康人和60例确定为尘螨过敏的AR患者的外周血。36例患者PBMC经50μg/ml尘螨变应原体外培养刺激,另24例AR患者接受了1年的应用标准化尘螨变应原的体内特异性免疫治疗（specific immunotherapy SIT）。用半定量的逆转录聚合酶链反应（reverse transcriptase-polymerase chain reaction RT-PCR）分析两组PBMC中的T-bet mRNA表达情况。在培养和SIT前后分别用流式细胞术（flow cytometry FCM ）和Unicap系统检测患者CD19/CD23和ECP水平。分别用免疫组化单染色法检测AR患者和非AR人群扁桃体腺样体和鼻粘膜中的T-bet表达,用免疫组化双染色法检测CD4/T-bet表达。SIT前后分别评估AR患者鼻部症状。结果尘螨变应原体外刺激36例AR患者PBMC前后,其T-bet与β-actin表达水平平均比值分别为0.45±0.13和0.44±0.11,差异没有统计学意义（t=-0.675, P=0.504）。24例AR患者PBMC前后,其T-bet与β-actin表达水平平均比值分别为0.44±0.14和0.49±0.09,差异有统计学意义（t =-2.324, P = 0.029）。在对照组,该比值为0.59±0.09,显著高于上述两组（P = 0.000）。ECP （μg/ml）和CD23（%）水平在对照组和AR组分别是4.67±1.34和25.58±17.22、5.99±2.44和13.53±5.41, P均小于0.01。42例单纯AR患者和合并有哮喘的18例AR患者的T-bet、ECP、CD23和症状评分分别是0.49±0.12和0.33±0.09、22.45±17.28和32.89±15.11、12.32±5.71和16.34±3.32、8.43±1.65和9.61±1.70, t分别是5.411、-2.224、-3.407和-2.526,各自P值分别是0.000、0.030、0.001和0.014。此外,上述4个指标没有性别之间的差异。T-bet mRNA表达强度与过敏症状无关（r =-0.214, P = 0.101）。然而, T-bet分别与ECP和CD23存在负相关关系（r =-0.292, P = 0.023, r=-0.260, P = 0.045）。过敏症状评分、ECP和CD23之间存在正相关,P值均小于0.05。经SIT后,ECP和CD23水平和症状评分均显著下降（t值分别为4.633、6.036和10.798, P均小于0.01）。经SIT后,T-bet mRNA表达显著上调（t =-2.324, P = 0.029）。在AR组扁桃体、腺样体和鼻黏膜组织中T-bet表达阳性率高于非AR组,差异有统计学意义,t值分别是4.038、3.860和4.912, P值分别是0.044、0.049和0.027;AR组扁桃体T-bet表达不同年龄组之间存在差异（χ2=7.079,P=0.029）,其中主要是成年组T-bet表达低于儿童组和青少年组;在非AR组人群扁桃体组织T-bet表达没有年龄组之间的差异。两组中扁桃体、腺样体和鼻粘膜中均有CD4和T-bet表达,大多数T-bet阳性表达位于CD4+ T细胞中。结论1.AR患者CD23和ECP水平高于非AR人群,但是T-bet在AR患者的PBMC和NALT中的表达均下调。2.AR患者经SIT后,可以看到T-bet表达的上调和CD23以及ECP水平的下降。CD23和ECP的水平在一定程度上反应了AR患者病情的严重程度。3.Th1相关转录因子T-bet的下调表达与AR患者系统和局部粘膜免疫Th1反应低下有关;T-bet对变应原体外反应低下,在尘螨特异性变应原体外刺激的变应性鼻炎患者外周血单核细胞中,转录因子和细胞因子的Th2优势不是由T-bet下调表达驱动的。4.变应原在体外诱导的Th2免疫反应,不是由Th1特异性转录因子T-bet介导的。5.变应性鼻炎SIT的机理的新认识:至少是在转录因子水平的Th1优势得到纠正来达到Th1/Th2的失衡,而这种方式是以Th1型特异性相关转录因子的上调表达介导的。6.NALT中的T-bet表达既与变应性炎症有关又和NALT的功能状态有关。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一章 尘螨变应原体内外刺激变应性鼻炎患者对转录因子T-bet、ECP 和CD23的影响
• 引言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 第二章 转录因子T-bet 在变应性鼻炎患者鼻咽相关淋巴组织中表达和意义
• 引言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 附录一 主要英汉缩略对照
• 附录二 发表文章
• 致谢