导读:本文包含了葡萄病毒论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:GVA,检出率,反转录-聚合酶链式反应,技术检测
葡萄病毒论文文献综述
胡国君,董雅凤,张尊平,范旭东,任芳[1]（2019）在《基于巢式反转录-聚合酶链式反应技术检测葡萄病毒A和葡萄病毒B》一文中研究指出皱木复合病在世界范围内普遍发生,是引起葡萄木质部畸形的一类病害的统称,在沙地葡萄、Kober5BB和LN33品种上表现茎痘、茎沟和栓皮等症状,其中葡萄病毒A(Grapevine virus A,GVA)与Kober5BB品种上出现茎沟症状有关,而葡萄病毒B(Grapevine virus B,GVB)与LN33品种上出现栓皮症状有关。GVA和GVB属葡萄病毒属,主要通过嫁(本文来源于《植物保护学报》期刊2019年04期）
张向昆[2]（2019）在《秦皇岛产区酿酒葡萄病毒病的侵染情况调查及RT-PCR检测》一文中研究指出中国至今已报道14种葡萄病毒病,葡萄病毒病的发生严重制约了我国葡萄产业的发展。秦皇岛是我国重要酿酒葡萄栽培基地之一,有关葡萄病毒病在秦皇岛各葡萄种植区的发病情况罕有报道。为此,本论文主要开展了以下叁方面研究:第一,调查了秦皇岛产区酿酒葡萄病毒病田间自然发病情况;第二,对疑似葡萄病毒病症状样品进行RT-PCR检测;第叁,对本产区葡萄卷叶病毒3和灰比诺病毒的分离物进行基因序列分析。明确秦皇岛产区感染葡萄病毒病的种类,为该产区葡萄病毒病的防控奠定基础。研究结果主要有以下几点:1.本研究对秦皇岛产区5个葡萄园8个酿酒品种感染葡萄扇叶病(GFLV)、葡萄卷叶病(GLRaVs)、葡萄病毒B(GVB)和葡萄斑点病毒(GFKV)的情况进行田间调查。结果发现,(1)GFLV和GLRaVs在秦皇岛葡萄产区普遍存在,且GLRaVs发病率最高;(2)GVB仅在朗格斯酒庄葡萄种植园有发现;(3)在调查的葡萄园中均未发现GFKV表现症状。(4)各葡萄种植园和品种间感染GLRaVs的情况不同,耿庄葡萄种植园GLRaVs发病率较高于其它4个种植园,‘美乐’和‘西拉’两个品种GLRaVs的感染率较高。2.对秦皇岛产区7种病毒病的疑似症状样品进行了RT-PCR检测,在所检测的样品中,检出GFKV、葡萄灰比诺病毒(GPGV)、GLRaV3和GVB四种病毒,其中GFKV、GPGV和GLRaV3在所有调查葡萄园均有检出,总检出率分别为49.9%、59%和47.3%。GLRaV3在‘小味儿多’品种的检出率最高,为82.2%;GFKV在‘小味儿多’品种的检出率最高,为84.4%;GPGV在‘小白玫瑰’品种的检出率最高,为93.3%;GVB在‘霞多丽’品种的检出率最高,为6.6%。此外,供试品种检测出有含GLRaV3和GFKV二重复合侵染。在单一病毒RT-PCR检测的基础上,建立了GLRaV3和GFKV双重RT-PCR检测体系,并优化了检测条件。3.对获得的阳性样品的GLRaV3-HSP70和GPGV-MP基因测序分析,结果表明,本研究GLRaV3-QHD分离株与国内外已报道分离株的HSP70基因核苷酸序列同源性在96.3%~99.3%;GPGV-QHD分离株与国内外已报道分离株的MP基因核苷酸序列同源性在93.3%~98.4%。(本文来源于《河北科技师范学院》期刊2019-06-01）
陶宁颖[3]（2019）在《‘阳光玫瑰’葡萄病毒病原鉴定与脱毒技术研究》一文中研究指出'阳光玫瑰'(Vlabruscana Bailey×V.vinifera L.Shine Muscat)是近年兴起的一种鲜食二倍体欧美杂交种葡萄。该品种是日本果树所经'安云津21号'(Akitsu-21)×'白南'(Hakunan V.vinifera)杂交选育而来。该品种呈黄绿色,果皮薄而果肉硬脆,正常栽培管理下可溶性固形物能达20%,具有诸多优良性状。但'阳光玫瑰,在我国各地栽培中普遍表现类似病毒病症状,包括叶片反卷、畸形、透明斑等等,对果实产量、质量造成严重影响。为此本研究展开了针对'阳光玫瑰'病毒病原鉴定,并探究高效的检测方法;探究适合'阳光玫瑰'的组织培养体系和脱毒技术。主要研究结果如下:1.不同果园'阳光玫瑰'树体调查发现类病毒病症状主要表现在叶片上,叶片表现不同类型的畸形,包括泡状皱缩、皱缩畸形、塔状畸形、叶缘反卷等。春季萌发后当年扦插苗、两年生幼树较多年生树容易表现症状,但是树势较旺的树体上一般至开花前均不表现症状,在挂果后至落叶前病树会大量表现病症。2.应用RT-PCR检测及核苷酸序列测定技术进行病原鉴定选定的10个品种调查样品中含有葡萄灰比诺病毒(GVPV)、葡萄卷叶伴随3型病毒(GLRaV-3)、葡萄斑点病毒(GFkV)、沙地葡萄茎痘相关病毒(GRSPaV)、葡萄病毒B(GVB)、葡萄病毒E(GVE)这6种病毒。其中'阳光玫瑰'含有GLRaV-3、GFkV、GRSPaV、GVB、GVE这5种病毒,且其检出率均高于平均检出率,5种病毒复合感染率达36.36%。3.优化模板浓度、引物浓度、聚合酶浓度等参数,建立了葡萄皱木复合病相关病毒GRSPaV、GVB、GVE的多重RT-PCR检测体系,即包含TaqMix 6 ul、模板cDNA1μl、GRSPaV对应特异性上下游引物各0.6μl、其他引物各0.4μl的10μl体系;以及引起葡萄叶片畸形的相关病毒GVPV、GLRaV-3、GFkV的多重RT-PCR检测体系,即包含TaqMix 6 ul、模板cDNA1μl、GLRaV-3对应特异性上下游引物各0.6μl、其他引物各0.4μl的10μl体系。4.'阳光玫瑰'单芽茎段为外植体的组织培养快速繁殖体系建立。无菌环境下离体培养诱使定芽萌发成株,其中外植体最佳消毒处理为0.1%氯化汞处理12 min,成活率为51.7%;最适茎段初代培养基激素水平为0.5mg/L6-BA+0.5mg/L KT,萌发率为56.2%;最适继代培养基为MS+0.5mg/L6-BA,增殖率为1.89;最适生根培养基为1/2MS+0.5mg/LNAA。5.'阳光玫瑰,茎尖组织培养体系建立。采用茎尖组织诱导再生的方法,其中外植体最佳消毒方案为0.1%氯化汞处理8 min,0.1 mm大小的外植体成活率为 64.4%;最适茎尖初代培养基为 1/2MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L KT+0.2 mg/L IBA。6.'阳光玫瑰'葡萄脱毒健康种苗创制。采用多种脱毒方法,包括茎尖组织培养、热处理脱毒、热处理结合茎尖组织培养、超低温处理结合茎尖组织培养。其中热处理结合茎尖组织培养优于其他方法,表现最佳,再生率为90%,GLRaV-3、GFkV、GRSPaV、GVB、GVE 的脱毒率分别为 100.0%、80.0%、95.0%、70.0%、45.0%。(本文来源于《浙江大学》期刊2019-03-01）
任芳,董雅凤,张尊平,范旭东,胡国君[4]（2018）在《葡萄病毒A实时荧光定量RT-PCR检测技术的建立及应用》一文中研究指出根据文献报道和GenBank已登录序列设计引物建立了葡萄病毒A(Grapevine virus A,GVA)SYBRGreenⅠ染料法实时荧光定量RT-PCR检测技术体系。该技术标准曲线循环阈值与模板浓度呈现良好线性关系,扩增效率为99.2%,决定系数为0.999,可特异性检测GVA,灵敏度高(达常规RT-PCR的100倍),重复性好。对不同季节、不同品种以及不同部位葡萄样品(嫩叶、嫩叶柄、老叶、老叶柄、卷须和休眠枝条)中GVA的检出率普遍高于常规RT-PCR。不同季节间比较,对秋、冬季样品检测效果最好,除嫩叶外其余部位检出率均达100%,春夏季检出率为10%～100%。不同部位间比较,老叶柄和休眠枝条检测效果最好,检出率均达100%,其次为老叶(80%～100%),其余部位样品检出率为10%～100%。在大量田间样品检测中,休眠枝条样品检测结果与常规RT-PCR一致,而秋季老叶柄样品检出率明显高于常规RT-PCR。(本文来源于《园艺学报》期刊2018年11期）
任芳,张尊平,范旭东,胡国君,张梦妍[5]（2019）在《应用实时荧光定量RT-PCR高效检测葡萄病毒B》一文中研究指出本研究建立了葡萄病毒B的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)检测技术。该技术标准曲线扩增效率102.4%,相关系数0.999,最低检测限达10~(-4)倍稀释cDNA,灵敏度为常规RT-PCR的100倍。重复性试验组内和组间变异系数分别为0.00%～0.65%和0.02%～2.00%,表明检测稳定性好。该技术对田间葡萄样品检测适用范围广,对枝条和老叶柄检测效果最好,冬季枝条和春夏秋季所有老叶柄样品检出率均为100%,与常规RT-PCR检测结果一致。对于其他季节或部位样品,RT-qPCR检出率(43%～74%)则普遍高于常规RT-PCR(5%～71%),特别是春季样品和春夏秋季所有嫩叶样品,检出率比常规RT-PCR分别高31%和38%。对来自我国13个省21个品种的52份田间葡萄样品检测结果表明,RT-qPCR共检测到6个样品为阳性,检出率11.5%,为常规RT-PCR(检出率5.8%)的2倍。(本文来源于《植物病理学报》期刊2019年04期）
李正男,马强,赵明敏[6]（2018）在《葡萄病毒B内蒙古分离物基因组序列分析及其侵染性克隆的构建》一文中研究指出葡萄皱木复合病(Rugose wood comples,RW)是葡萄上普遍发生且危害严重的一类病毒病,研究证明该病害与葡萄病毒B(GVB)的侵染相关,内蒙古乌海地区是内蒙古最大的葡萄产区,为了明确内蒙古地区GVB的基因组特征,我们设计了2对扩增引物结合RACE技术,成功获得了GVB-WH分离物的全长基因组序列,该分离物基因全长为7600 nt,与NCBI中报道的7个GVB全长基因组序列核酸一致性为84.0%～90.0%,基因组结构与已报道的7个GVB分离物相同,基于全长基因组序列的系统发育分析结果表明GVB-WH分离物可以单独形成分支。为开展GVB与寄主互作研究,我们采用融合克隆的方法将GVB-WH全长基因组与pCass4-Rz载体融合,成功构建了重组质粒pCaGVB-WH,将构建的质粒转入农杆菌GV3101后注射接种西方烟,接种10d后西方烟表现为黄化、卷叶、枯死等症状,RT-PCR检测以及病毒负染观察结构都验证病毒成功侵染。本研究获得的GVB-WH分离物与已报道GVB分离物基因组序列有较高变异度且生成新的系统发育树分支,成功构建了具有生物活性的GVB侵染性克隆载体,为进一步开展GVB与寄主互作研究奠定了基础。(本文来源于《中国植物病理学会2018年学术年会论文集》期刊2018-08-24）
王建辉,刘建军,陈克玲,李洪雯,何建[7]（2018）在《瞬时表达葡萄病毒A外壳蛋白基因对烟草中病毒转录的影响》一文中研究指出为验证葡萄病毒基因在模式植株上瞬时表达对接种宿主中病毒复制与感病症状的影响,本研究以一株鲜食葡萄无核王子混合感染葡萄病毒A(GVA)的不同变异株为试验材料,克隆其中一个变异株的外壳蛋白基因的部分核酸序列。在p BI121质粒35S启动子后插入具有发夹结构的外壳蛋白基因片段并转化农杆菌EHA105。农杆菌瞬时浸润本氏烟叶片5 d后,以摩擦接种GVA侵染性克隆的体外转录物作为处理组,只单独接种病毒侵染性克隆体外转录物的烟草作为对照组。结果表明,GVA体外转录产物接种30 d后,对照组植株系统叶表现黄化症状,而瞬时表达具有发夹结构的病毒外壳蛋白基因的处理组植株症状不明显,且系统叶上病毒基因的转录量相对较低,表明宿主叶片上瞬时表达病毒结构基因,可诱导植物产生抗病性,该结果为抗病葡萄种质的创制提供了一定的理论依据。(本文来源于《核农学报》期刊2018年09期）
任芳,张尊平,范旭东,胡国君,李正男[8]（2018）在《葡萄病毒B CP基因植物表达载体构建及烟草遗传转化》一文中研究指出葡萄病毒B Grapevine virus B(GVB)是葡萄皱木复合病中栓皮病的病原,为开展抗GVB转基因研究,本研究利用RT-PCR技术克隆GVB外壳蛋白(coat protein,CP)基因,与植物表达载体pRI 101-AN连接构建植物表达载体pRI-GVB CP。采用电击转化法将植物表达载体pRI-GVB CP导入农杆菌LBA4404,并利用农杆菌介导的叶盘转化法将外源基因导入西方烟‘37B’。共获得16个烟草再生株系,PCR检测其中3个株系为阳性,阳性株系播种获得的64株T_1代植株中有30株扩增到目的条带,阳性率为46.9%,表明目的基因GVB cp成功导入烟草并可成功遗传到子代。28株T_1代转基因植株接种病毒进行抗病性鉴定,其中有6株对接种病毒GVB具有抗性。(本文来源于《植物保护》期刊2018年03期）
范旭东,张尊平,任芳,胡国君,李正男[9]（2018）在《我国灰比诺葡萄病毒分离物检测及基因序列分析》一文中研究指出灰比诺葡萄病毒(Grapevine Pinot gris virus,GPGV)是国内新近报道的葡萄病毒,能引起葡萄叶片褪绿斑驳、皱缩及变形等症状,严重影响葡萄长势。为明确我国GPGV的发生及基因序列变异情况,本研究采用RT-PCR方法对采自我国15个省(市)自治区的195个葡萄样品进行检测,其中55个葡萄样品检测出GPGV。对49个GPGV阳性分离物的外壳蛋白(coat protein,cp)和运动蛋白(movement protein,mp)基因进行克隆、测序,序列分析结果显示:来源于国内外的GPGV分离物cp基因和mp基因的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为85.30%~100%和95.00%~100%、85.73%~99.87%和95.58%~100%。基于cp和mp基因序列构建的进化树,将GPGV分离物划分为3个明显的组群。其中,大部分GPGV分离物被划分在组群1内,其它中国GPGV分离物形成2个新的组群2和3。本研究是关于中国GPGV分离物基因序列变异的初次报道,可为进一步开展GPGV分子检测的技术研发及不同变种的致病性研究提供依据。(本文来源于《植物病理学报》期刊2018年04期）
吕苗苗,纳莹,孙牧笛,徐全智,顾沛雯[10]（2017）在《宁夏贺兰山东麓酿酒葡萄病毒病田间自然发病率调查及检测》一文中研究指出对宁夏贺兰山东麓8个酿酒葡萄种植地区8个葡萄品种的病毒病田间自然发病情况进行调查,采用RT-PCR方法,检测了40份样品中GLRaV-1~5这5种葡萄卷叶伴随病毒的感染率。结果表明:宁夏贺兰山东麓酿酒葡萄主要病毒病有葡萄卷叶病、扇叶病和栓皮病,其中葡萄卷叶病尤为严重;不同酿酒葡萄种植区和品种间葡萄卷叶病的感染存在着差异,老葡萄种植区中品种间葡萄卷叶病发病率明显高于新葡萄种植区的品种;"蛇龙珠"和"黑比诺"是感染葡萄卷叶病毒的主要品种,发病率高达85.1%和52.7%;利用5种葡萄卷叶伴随病毒引物进行RT-PCR检测,检出3种病毒类型,且GLRaV-3的检出率最高,为87.5%。(本文来源于《北方园艺》期刊2017年13期）
葡萄病毒论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
中国至今已报道14种葡萄病毒病,葡萄病毒病的发生严重制约了我国葡萄产业的发展。秦皇岛是我国重要酿酒葡萄栽培基地之一,有关葡萄病毒病在秦皇岛各葡萄种植区的发病情况罕有报道。为此,本论文主要开展了以下叁方面研究:第一,调查了秦皇岛产区酿酒葡萄病毒病田间自然发病情况;第二,对疑似葡萄病毒病症状样品进行RT-PCR检测;第叁,对本产区葡萄卷叶病毒3和灰比诺病毒的分离物进行基因序列分析。明确秦皇岛产区感染葡萄病毒病的种类,为该产区葡萄病毒病的防控奠定基础。研究结果主要有以下几点:1.本研究对秦皇岛产区5个葡萄园8个酿酒品种感染葡萄扇叶病(GFLV)、葡萄卷叶病(GLRaVs)、葡萄病毒B(GVB)和葡萄斑点病毒(GFKV)的情况进行田间调查。结果发现,(1)GFLV和GLRaVs在秦皇岛葡萄产区普遍存在,且GLRaVs发病率最高;(2)GVB仅在朗格斯酒庄葡萄种植园有发现;(3)在调查的葡萄园中均未发现GFKV表现症状。(4)各葡萄种植园和品种间感染GLRaVs的情况不同,耿庄葡萄种植园GLRaVs发病率较高于其它4个种植园,‘美乐’和‘西拉’两个品种GLRaVs的感染率较高。2.对秦皇岛产区7种病毒病的疑似症状样品进行了RT-PCR检测,在所检测的样品中,检出GFKV、葡萄灰比诺病毒(GPGV)、GLRaV3和GVB四种病毒,其中GFKV、GPGV和GLRaV3在所有调查葡萄园均有检出,总检出率分别为49.9%、59%和47.3%。GLRaV3在‘小味儿多’品种的检出率最高,为82.2%;GFKV在‘小味儿多’品种的检出率最高,为84.4%;GPGV在‘小白玫瑰’品种的检出率最高,为93.3%;GVB在‘霞多丽’品种的检出率最高,为6.6%。此外,供试品种检测出有含GLRaV3和GFKV二重复合侵染。在单一病毒RT-PCR检测的基础上,建立了GLRaV3和GFKV双重RT-PCR检测体系,并优化了检测条件。3.对获得的阳性样品的GLRaV3-HSP70和GPGV-MP基因测序分析,结果表明,本研究GLRaV3-QHD分离株与国内外已报道分离株的HSP70基因核苷酸序列同源性在96.3%~99.3%;GPGV-QHD分离株与国内外已报道分离株的MP基因核苷酸序列同源性在93.3%~98.4%。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
葡萄病毒论文参考文献
[1].胡国君,董雅凤,张尊平,范旭东,任芳.基于巢式反转录-聚合酶链式反应技术检测葡萄病毒A和葡萄病毒B[J].植物保护学报.2019
[2].张向昆.秦皇岛产区酿酒葡萄病毒病的侵染情况调查及RT-PCR检测[D].河北科技师范学院.2019
[3].陶宁颖.‘阳光玫瑰’葡萄病毒病原鉴定与脱毒技术研究[D].浙江大学.2019
[4].任芳,董雅凤,张尊平,范旭东,胡国君.葡萄病毒A实时荧光定量RT-PCR检测技术的建立及应用[J].园艺学报.2018
[5].任芳,张尊平,范旭东,胡国君,张梦妍.应用实时荧光定量RT-PCR高效检测葡萄病毒B[J].植物病理学报.2019
[6].李正男,马强,赵明敏.葡萄病毒B内蒙古分离物基因组序列分析及其侵染性克隆的构建[C].中国植物病理学会2018年学术年会论文集.2018
[7].王建辉,刘建军,陈克玲,李洪雯,何建.瞬时表达葡萄病毒A外壳蛋白基因对烟草中病毒转录的影响[J].核农学报.2018
[8].任芳,张尊平,范旭东,胡国君,李正男.葡萄病毒BCP基因植物表达载体构建及烟草遗传转化[J].植物保护.2018
[9].范旭东,张尊平,任芳,胡国君,李正男.我国灰比诺葡萄病毒分离物检测及基因序列分析[J].植物病理学报.2018
[10].吕苗苗,纳莹,孙牧笛,徐全智,顾沛雯.宁夏贺兰山东麓酿酒葡萄病毒病田间自然发病率调查及检测[J].北方园艺.2017
标签：GVA; 检出率; 反转录-聚合酶链式反应; 技术检测;