转NPR1/HRP基因甜瓜的抗病性研究

论文摘要

目的：各种病害是影响甜瓜产业发展的主要因素,提高甜瓜的抗病性对于甜瓜生产具有重要意义。植物的NPR1基因在植物的系统性获得性抗性中起着关键作用。Harpins蛋白基因能够显著提高植物的抗病能力。本论文利用病原物诱导的启动子驱动的双价NPR1/Harpin基因,遗传分析转基因甜瓜抗病性。方法：通过建立转基因甜瓜的再生体系；利用根癌农杆菌（GV3101）介导的方法,将构建的pCAMBIA2300-PR1α-NPR1-SAR-HRP植物双价表达载体转入甜瓜（TM108）,经卡那霉素筛选获得转基因植株；将T0代转基因植株移栽到大田,自花授粉获得种子,用T1代种子在实验室培养,通过PCR和RT-PCR检测,将阳性的植株接种枯萎病菌和从感病甜瓜组织分离的病原菌。结果：1.利用5d苗龄的无菌苗子叶,不定芽分化培养基为MS+6-BA1.0mg/L+IAA0.3mg/L,芽伸长培养基为MS+6-BA0.75mg/L+IAA0.3mg/L,生根培养基为1/2MS+IAA0.3mg/L。成功了建立高效的甜瓜再生体系,芽诱导率达95%。2.通过根癌农杆菌介导的方法将NPR1/HRP抗病基因转入甜瓜,PCR检测证明外源基因已成功整合到甜瓜基因组。3.对20棵T1代幼苗用PCR和RT-PCR检测,其中14棵植株反应为阳性,表明NPR1/HRP基因成功整合到甜瓜基因组中并表达。通过抗病性实验,发现转基因甜瓜对枯萎病菌和我们从感病植株组织中分离到的致病菌具有抗性。4.转NPR1/HRP基因甜瓜比野生型开花时间早,其他生物学性状没有明显改变。结论：成功建立甜瓜再生体系,将外源基因NPR1和HRP基因转入甜瓜,获得T1代转基因甜瓜,提高了对某些病原菌的抗性。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 中英符号缩略词表
• 第一章 文献综述
• 1.1 甜瓜组织培养研究进展
• 1.2 甜瓜组织培养在甜瓜育种中的应用
• 1.3 植物遗传转化技术的研究现状
• 1.4 甜瓜遗传转化研究进展
• 1.5 NPR1基因研究现状
• 1.6 HRP基因研究现状
• 1.7 植物系统获得抗性
• 第二章 甜瓜高效再生体系的建立
• 2.1 材料,试剂及仪器
• 2.2 方法
• 2.3 结果与分析
• 第三章 转NPR1/HRP基因甜瓜的获得及抗病性研究
• 3.1 材料与试剂
• 3.2 NPR1/HRP基因对甜瓜的转化
• 3.3 转NPR1/HRP基因甜瓜的分子检测
• 3.4 甜瓜瓜病的分离
• 3.5 抗病性实验
• 3.6 结果与分析
• 第四章 转GAFP基因甜瓜的获得
• 4.1 材料
• 4.2 方法
• 4.3 结果与分析
• 第五章 结论与讨论
• 5.1. 结论
• 5.2 讨论
• 参考文献
• 附录一 主要技术路线
• 附录二 主要培养基、溶液配制
• 致谢
• 作者简介
• 导师评阅表