论文摘要
人白细胞介素3（Human interleukin-3, hIL-3）又称多集落刺激因子（Multicolony stimulating factor, Multi-CSF）,是由活化的T 淋巴细胞产生的多谱系造血因子,可以促进造血干细胞和多系祖细胞的增殖,分化和存活, 是一种临床上极有前途的血细胞生成因子。但是hIL-3 在体内的毒副作用也很明显,严重地限制了其在临床上的应用,因此有必要对hIL-3 进行蛋白质工程改造,以期获得活性更高的突变体。 本文通过定点突变的方法使IL-3的第116位的赖氨酸分别被缬氨酸和色氨酸取代,获得了hIL-3的突变体hIL-3K116V和hIL-3K116W。优化了其在大肠杆菌BL21 CodonPlus（DE3）-RIL中的实验室表达条件,表达的目的蛋白占菌体总蛋白的40%以上,并且主要以包涵体的形式存在,亲和层析后纯度达90%以上。透析复性后获得有活性的目的蛋白,促TF-1细胞增殖分析的结果表明,hIL-3K116V的活性是hIL-3的5倍,hIL-3K116W活性也有所增加,特别是在低浓度的情况下。这些结果都证明第116位的赖氨酸残基对于hIL-3的活性十分重要,突变体hIL-3K116V也有望成为高活性的hIL-3的替代品。 另外,我们还构建了原核细胞表达载体pT7450-K116V,在大肠杆菌中得到表达,研究了hIL-3K116V的离子交换纯化条件,为实现该突变体的大规模表达纯化和临床应用提供了条件。
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