论文摘要
目的:分离膀胱移行细胞癌中差异表达microRNAs,用miRNA芯片技术筛选差异表达microRNAs,实时荧光定量PCR验证其表达量。探讨差异表达microRNAs在膀胱移行细胞癌中的作用机制。方法:取5例膀胱移行细胞癌（术前活检及术后病理检测结果均证实为膀胱移行细胞癌）患者手术切除的新鲜膀胱癌组织标本做为膀胱癌组;1例良性前列腺增生患者的膀胱粘膜组织标本做为对照组（与各样本分别作对照）。Trizol法提取总RNA ,用紫外线吸收测定法行RNA质量检测。采用miRCURYTM Array Power标记试剂盒,用标记酶Hy3TM荧光集团标记miRNA得到用于与芯片杂交的荧光探针,在标准条件下使用PhalanxTM的热收缩杂交袋将标记好的探针和miRCURYTM芯片杂交。使用GenePix 4000B芯片扫描仪扫描芯片的荧光强度,并将实验结果转换成数字型数据保存。使用Genepix Pro 6.0软件获取荧光扫描图像和对原始数据进行分析运算。选取各样本表达均上调及下调的miRNAs各5个,用实时荧光定量PCR技术验证芯片实验结果。结果:1﹑所提取的RNA经过质量检测符合芯片实验需求。2﹑膀胱癌组分别和对照组芯片研究结果发现2340个miRNA差异表达。有131个miRNA在膀胱移行细胞癌中差异表达显著且表达一致（其中43个表达显著上调,88个表达显著下调）。3﹑选取各膀胱癌标本中均表达显著上调的has-miR-429, has-miR-29b, has-miR-106b, has-miR-106a, has-miR-17和表达均显著下调的has-miR-143,has-miR-32﹡, has-miR-149﹡, has-miR-100, has-miR-340进行定量研究,其结果均符合芯片分析结果。结论:膀胱移行细胞癌中存在差异表达的miRNAs,这些差异表达的miRNAs有可能作为膀胱癌新的诊断标记和治疗的新靶点。