补肾健骨中药对女性运动员骨组织保健的机理研究

论文摘要

目的:本研究通过体外分别培养大鼠卵巢颗粒细胞、成骨细胞与共同培养这两种细胞,测定与分析杜仲叶提取物对大鼠颗粒细胞产生雌激素的影响,进一步观察与分析颗粒细胞所产生的雌激素对成骨细胞分泌碱性磷酸酶（ALP）的影响,从细胞与分子水平探讨补肾健骨中药杜仲叶提取物对Ⅰ型骨质疏松症的防治机理,为保护女性运动员骨组织健康提供营养保健依据。方法:细胞水平研究——加入不同浓度的杜仲叶提取物于培养基中,进行大鼠卵巢颗粒细胞体外培养,作用48小时后,采用MTT法测定细胞增殖率,采用酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked immunosorbent assay ,ELISA）测定各培养液中雌二醇（E2）的生成量。采用胶原酶消化法体外分离培养大鼠成骨细胞,取第三代成骨细胞进行培养,以颗粒细胞和成骨细胞数目比（2:1,1:2）直接混合培养,加入最适浓度的杜仲叶提取物,培养72小时,测定培养液中生成碱性磷酸酶（ALP）的量。分子水平研究——采用RT-PCR技术,分析测定杜仲叶提取物对成骨细胞表达护骨因子OPG量的影响。结果:用不同浓度的杜仲叶提取物分别作用于颗粒细胞48小时,杜仲叶提取物可增加颗粒细胞的增殖和雌二醇的生成量,随着浓度的降低,促进作用逐渐减弱,呈剂量依赖性关系。在10-5g/ml时与对照组比较有显著性差异（P<0.05）。在成骨细胞和颗粒细胞的共同培养72小时后,颗粒细胞和成骨细胞数目比为1:2组效果明显,其中共同培养产生的碱性磷酸酶的浓度与相同数目单独培养的成骨细胞中直接加杜仲叶提取物产生的碱性磷酸酶浓度相比较,有显著性差异（P<0.05）。杜仲叶提取物可提高成骨细胞护骨因子OPG表达量。结论:杜仲叶提取物呈剂量依赖性地增加大鼠颗粒细胞雌二醇的生成量,同时在颗粒细胞和成骨细胞混合培养中,颗粒细胞产生的雌二醇又可以增加成骨细胞碱性磷酸酶的分泌,表明杜仲叶提取物除直接促进成骨细胞的生成外,还可通过对性腺的作用来增加体内雌激素的分泌促进成骨细胞的生成。因此杜仲叶提取物防治骨质疏松症是多靶点的;在分子水平上,通过促进成骨细胞表达护骨因子OPG而发挥防治骨质疏松症的作用。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 1. 绪论
• 1.1 前言
• 1.2 运动-雌激素-骨代谢相关性研究进展
• 1.2.1 引言
• 1.2.2 适宜运动对雌激素、骨代谢的影响
• 1.2.3 大强度运动对雌激素、骨密度的影响
• 1.2.4 雌激素水平降低是PMOP 发病的首要因素
• 1.2.5 雌激素是维持骨代谢平衡的重要因素
• 1.2.6 雌激素与骨代谢过程中相关激素、细胞因子的关系
• 1.2.7 雌激素受体与骨质疏松
• 1.2.8 竞技性、专职女运动员的骨组织调养与保健
• 1.3 绝经后骨质疏松症的中西医研究进展
• 1.3.1 绝经后骨质疏松症的西医学研究
• 1.3.2 中医学对绝经后骨质疏松的认识
• 1.3.3 结语
• 2. 实验研究的目的和意义
• 3. 实验研究
• 3.1 杜仲叶提取物对体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞增殖和分泌 激素的影响
• 3.1.1 实验动物
• 3.1.2 主要试剂
• 3.1.3 主要仪器与器材
• 3.1.4 方法
• 3.1.5 结果
• 3.2 杜仲叶提取物对成骨细胞和颗粒细胞混合培养中成骨细胞 分泌碱性磷酸酶的影响
• 3.2.1 实验动物
• 3.2.2 主要试剂
• 3.2.3 主要仪器与器材
• 3.2.4 方法
• 3.2.5 结果
• 3.3 成骨细胞总 RNA 的提取及 OPG 的 RT-PCR 实验
• 3.3.1 主要试剂
• 3.3.2 主要仪器
• 3.3.3 主要试剂的配制
• 3.3.4 成骨细胞总RNA 的提取
• 3.3.5 成骨细胞总 RNA 电泳
• 3.3.6 RT-PCR 扩增
• 3.3.7 PCR 产物琼脂糖凝胶电泳
• 3.3.8 结果
• 4. 讨论
• 4.1 中医药防治绝经后骨质疏松的机理探讨
• 4.2 对动物选择的评价
• 4.3 卵巢颗粒细胞的收集
• 4.4 杜仲提取物直接给药对大鼠卵巢颗粒细胞增殖和分泌功能的影响
• 4.5 体外培养成骨细胞的选择
• 4.6 杜仲提取物防治绝经后骨质疏松的机理探讨
• 4.7 杜仲提取物在性腺轴中卵巢一级水平的调节作用
• 4.8 杜仲提取物对女运动员骨组织保健的机理探讨
• 4.9 本实验前景与展望
• 5. 小结
• 5.1 实验结果
• 5.2 结论
• 5.3 创新点
• 5.4 本课题尚待解决的问题
• 参考文献
• 致谢