论文摘要
骨肉瘤是青少年最常见的骨原发恶性肿瘤,虽然保肢手术和新辅助化疗方案的实施使骨肉瘤的预后有很大的提高,但是相当一部分患者因多药耐药而预后不良,因此迫切需要对骨肉瘤耐药机制进行更深入的研究。前期工作中我们应用基因芯片技术检测到VEGF和NF-κB1基因可能与骨肉瘤耐药相关,本次课题我们建立骨肉瘤动物模型并将围绕这两个基因,通过免疫组化和RT-PCR技术进一步验证VEGF和NF-κB1基因在骨肉瘤MG63耐药细胞株和亲本细胞株的表达情况,为进一步探讨骨肉瘤的耐药机制和寻求更有效的治疗靶点提供实验依据。第一章MG63和MG63/ADR骨肉瘤裸鼠模型的建立目的:建立MG63和MG63/ADR骨肉瘤裸鼠模型。方法:采用阿霉素浓度递增培养法,建立人骨肉瘤MG63的多药耐细胞株MG63/ADR。BALB/C裸鼠随机分为两组,分别将MG63和MG63/ADR细胞采用皮下接种法注入裸鼠的一侧腋部皮下建立骨肉瘤裸鼠模型。结果:与MG63细胞比较,MG63/ADR细胞G0/G1期细胞减少10.61%,S期细胞增加15.06%。该细胞株对多种抗肿瘤药物耐药,MG63/ADR对阿霉素的耐药指数是亲本细胞的9.09倍,对顺铂（DDP）、甲氨蝶呤（MTX）、表阿霉素（EPB）、长春新碱（VCR）四种药物耐药指数均显著增加。接种MG63和MG63/ADR细胞后,裸鼠均于l周左右成瘤,两组在接种部位均有肿瘤生长,成瘤率100%。结论:成功建立MG63和MG63/ADR骨肉瘤裸鼠模型,为进一步开展骨肉瘤耐药相关研究提供了实验模型。第二章VEGF和NK-κB1基因在骨肉瘤裸鼠模型中的表达及其意义目的:检测MG63和MG63/ADR骨肉瘤裸鼠模型中VEGF和NF-κB1基因表达的差异及其意义。方法:建立MG63和MG63/ADR骨肉瘤裸鼠模型后,第6周处死裸鼠,采用免疫组织化学及RT-PCR的方法检测两组瘤灶中VEGF和NF-κB1基因表达的差异。结果:MG63/ADR组瘤灶中VEGF和NF-κB1基因的表达均明显高于MG63组（P<0.05）。结论:VEGF和NF-κB1基因表达的上调可能是导致骨肉瘤耐药的重要原因,为探讨骨肉瘤耐药的分子机制和临床上寻求更有效的骨肉瘤治疗靶点提供了实验依据。
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