人三叶因子1相互作用蛋白基因的筛选

论文摘要

目的:观察人三叶因子1（human trefoil family factor 1, hTFF1）在人正常及胃癌组织黏膜中的表达改变;筛选人胃癌细胞cDNA文库中hTFF1相互作用蛋白基因,探讨其在胃癌发生发展中的作用机制。方法:采用免疫组化方法测定人正常及胃癌组织胃黏膜中hTFF1的表达情况;从人正常胃黏膜提取组织总RNA,RT-PCR扩增人hTFF1基因,构建酵母双杂交诱饵融合质粒pDEST32-hTFF1;采用BP反应及LR反应构建酵母双杂交猎物融合质粒pDEST22-胃癌细胞cDNA文库;将诱饵融合质粒及猎物融合质粒共同转化Mav203酵母细胞进行酵母双杂交,缺陷型固体培养基上筛选阳性相互作用克隆;提取阳性克隆猎物质粒,DNA测序后,利用核苷酸数据库及生物信息学技术分析筛选结果,明确胃癌细胞cDNA文库中三叶因子1相互作用蛋白基因;构建分别表达候选相互作用蛋白及hTFF1的诱饵质粒及猎物质粒,反向酵母双杂交验证两者之间的相互作用。结果:hTFF1在胃癌黏膜中的表达低于正常胃黏膜组织（P﹤0.05）;从人正常胃黏膜成功克隆了hTFF1基因,构建了pDEST32- hTFF1酵母表达质粒及pDEST22-胃癌细胞cDNA文库。酵母双杂交筛选获得24个阳性克隆,其中1个克隆测序成功,为FAM38A （Homo sapiens family with sequence similarity 38, member A）蛋白基因。反向双杂交进一步验证了FAM38A与hTFF1的相互作用。结论:hTFF1可能与抑制胃癌发生发展密切相关;成功筛选并克隆出胃癌细胞中三叶因子1相互作用蛋白——多跨膜蛋白FAM38A基因,有利于进一步研究三叶因子1在胃癌发生发展中的作用机制。

论文目录

• 英文缩略词表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 主要仪器和材料
• 1 主要材料
• 2 主要仪器
• 3 主要试剂及配方
• 前言
• 第一部分 TFF1 在正常及胃癌组织黏膜中的表达改变
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 第二部分 诱饵质粒及猎物质粒的构建
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 第三部分 酵母双杂交技术筛选三叶因子 1 相互作用蛋白基因
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 第四部分 反向酵母双杂交技术验证 hTFF1 相互作用蛋白基因
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 综述 三叶因子 1 研究进展
• 在读期间工作小结