论文摘要
目的：探讨鱼藤酮不同浓度及不同作用时间对中脑原代培养细胞的毒性作用，并初步探讨其毒性作用机理；研究辅酶Q10对鱼藤酮损伤的多巴胺能神经元损伤是否具有保护作用及其机制。方法：1、原代培养孕14 d的胎鼠中脑多巴胺能神经元至第6天，分别建立对照组、鱼藤酮组和辅酶Q10保护组：对照组：不加鱼藤酮；鱼藤酮A组、B组、C组：分别加入5 nmol·L-1、15 nmol·L-1、30 nmol·L-1终浓度的鱼藤酮作用24 h；鱼藤酮D组、B组、E组：加入15 nmol·L-1终浓度的鱼藤酮分别作用12h、24h、48h；辅酶Q10保护组（X、Y、Z组）：分别予以10μmol·L-1、50μmol·L-1、100μmol·L-1终浓度的辅酶Q10预处理中脑多巴胺能神经元12h后，再加入15nmol·L-1终浓度鱼藤酮作用24h。2、倒置相差显微镜下观察细胞形态及数目变化，通过TH免疫细胞化学染色和PI荧光染色，荧光显微镜下观察TH阳性细胞的数目、形态状况和红色荧光细胞数目，LDH试剂盒测定LDH值以了解细胞活力，以罗丹明123染料进行流式细胞仪检测线粒体膜电位（△ψm），以了解鱼藤酮对中脑原代培养细胞的毒性作用及辅酶Q10对鱼藤酮损伤的多巴胺能神经元损伤是否具有保护作用。结果：1、原代培养孕14 d胚胎SD大鼠中脑神经元后，于体外培养第6 d进行TH免疫细胞化学染色鉴定，结果显示，培养神经元中TH阳性细胞数目较多。2、5 nmol·L-1鱼藤酮（鱼藤酮A组）干预多巴胺能神经元24 h后，TH阳性细胞数目减少，突起变短，PI染色阳性细胞数目增多，细胞LDH漏出率(U·mL-1)由329．41±7．78上升至418．62±13．54（P<0．05），△ψm（％）由100±0明显下降至82．69±0．54（P<0．05）。随着鱼藤酮作用浓度的增高，TH阳性细胞数目进一步减少，突起变短甚至消失，PI染色阳性细胞数目进一步增多，15 nmol·L-1和30 nmol·L-1鱼藤酮组（鱼藤酮B组和鱼藤酮C组）的LDH值(U·mL-1)分别升至434．27±3．75（P<O．05）和447．62±6．53（P<0．05），其△ψm（％）分别降至80．91±1．49（P<O．05）和70．54±7．59（P<0．05）。且鱼藤酮A组与鱼藤酮C组的LDH值也具有统计学差异（P<O．05）。3、15 nmol·L-1鱼藤酮（鱼藤酮D组）干预多巴胺能神经元12h后，TH阳性细胞数目减少，胞体变小变圆，突起变短，PI染色阳性细胞数目增多，细胞LDH漏出率(U·mL-1)由329．41±7．784上升至420．93±6．45（P<0．05），△ψm（％）由100±0明显下降82．36±0．44（P<0．05）。随着鱼藤酮作用时间的延长，TH阳性细胞数目进一步减少，突起变短甚至消失，PI染色阳性细胞数目进一步增多，15 nmol·L-1鱼藤酮作用24 h和作用48 h（鱼藤酮B组和鱼藤酮E组）后的LDH值(U·mL-1)分别升至434．27±3．75（P<0．05）和452．21±11．44（P<0．05），其△ψm（％）分别降至80．91±1．49（P<O．05）及62．66±2．50（P<0．05）。且鱼藤酮D组与鱼藤酮E组的LDH值也具有统计学差异（P<0．05）。4、与鱼藤酮B组比较，辅酶Q10预处理X组，未见明显改变；而辅酶Q10预处理Y、Z组，TH阳性染色显示TH阳性细胞数目增多，突起较长，PI染色显示红色荧光细胞减少，LDH值分别降至410．24±11．29（P<0．05）和414．57±2．94（P<0．05），△ψm（％）由80．91±1．49分别升至86．83±1．34（P<0．05）及91．13±5．01（P<0．05）。结论：1、鱼藤酮对中脑原代培养神经元具有明显毒性作用，能显著降低细胞活力及线粒体膜电位，其作用具有量-效倾向及时-效倾向。2、鱼藤酮对中脑原代培养神经元的毒性作用很可能是通过破坏神经元线粒体功能实现的。3、辅酶Q10能有效抑制鱼藤酮对中脑原代培养神经元的毒性作用，能保护细胞膜的完整性及线粒体膜电位的去极化，其保护作用具有量一效倾向。4、辅酶Q10对鱼藤酮损伤的中脑原代培养神经元的保护作用可能是通过保护其线粒体功能实现。
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