实验性动脉粥样硬化模型兔动脉内皮细胞p38磷酸化与MLCK的表达相关性及其褪黑素的作用

论文摘要

目的:探讨动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）模型兔动脉内皮细胞p38磷酸化与肌球蛋白轻链激酶（myosin light chain kinase ,MLCK）的表达的关系及褪黑素（melatonin,MLT）是否通过p38/MAPK通路调控AS模型兔动脉内皮细胞MLCK的表达。方法:高胆固醇饮食诱发兔AS模型,检测血清中血脂变化;Western blot检测p38磷酸化水平;Western blot与免疫组织化学法检测MLCK蛋白表达水平,MLT治疗给药（10mg/kg/d,d43-d84）,γ-32P-ATP掺入法测定模型兔主动脉的MLCK活性;体外培养人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）,分空白对照组、DMSO对照组、DMSO+oxLDL组、DMSO+oxLDL+SB203580组、DMSO+oxLDL+MLT组、DMSO+oxLDL+MLT+SB203580组。RT-PCR、Western blot、γ-32P-ATP掺入法检测观察各组HUVEC p38磷酸化以及MLCK转录、表达和活性。结果:动脉粥样硬化兔模型复制成功, MLT能降低AS模型兔血脂水平; Western blot和免疫组化显示高脂组动脉内皮细胞p38磷酸化水平、MLCK的表达与正常对照组相比增强,MLT组与高脂组相比降低。γ-32P-ATP掺入法显示高脂组动脉组织中MLCK的活性与正常对照组相比增强,MLT组与高脂组相比MLCK活性降低。RT-PCR显示oxLDL组MLCK转录增强,MLT组与SB203580组均抑制MLCK的转录,二者具有协同效应; Western blot结果表明oxLDL组MLCK表达、p38磷酸化增强,MLT组与SB203580组均抑制MLCK的表达及p38磷酸化,二者具有协同效应;γ-32P-ATP掺入法检测MLCK活性提示oxLDL组MLCK活性增强,MLT与SB203580降低MLCK活性。结论:AS模型兔主动脉组织中MLCK表达与p38磷酸化呈现一致性。MLT可能通过p38/MAPK通路下调模型兔动脉内皮细胞MLCK表达和活性从而减轻AS斑块的病变程度。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 1. 引言
• 2. 材料与方法
• 2.1 常用仪器
• 2.2 AS 模型的建立
• 2.3 兔主动脉标本的制备及处理
• 2.4 MLCK 的抽提
• 2.5 MLCK 活性测定
• 2.6 血清脂质的测定
• 2.7 总蛋白含量的测定
• 2.8 Western blot
• 2.9 冰冻切片的制备
• 2.10 HE 染色
• 2.11 免疫组织化学
• 2.12 细胞实验
• 3. 结果
• 3.1 AS 模型的建立
• 3.2 高脂血症兔模型兔血清中血脂成分的变化
• 3.3 AS 模型兔动脉中P38 表达的变化
• 3.4 AS 兔动脉MLCK 表达
• 3.5 MLCK 活性测定
• 3.6 MLT 与 SB203580 对 HUVEC 形态的影响
• 3.7 MLT 与 SB203580 对 HUVEC MLCK 转录水平的影响
• 3.8 MLT 与 SB203580 对 HUVEC MLCK 表达的影响
• 3.9 MLT 与 SB203580 对 HUVEC MLCK 活性的影响
• 3.10 MLT 与 SB203580 对 HUVEC p38 磷酸化的影响
• 4. 讨论
• 5. 结论
• 参考文献
• 对本课题的进一步设想
• 简历
• 致谢
• 综述（动脉粥样硬化发生机制的研究进展和褪黑素对其的作用）
• 参考文献