论文摘要
本次研究既将pUCY-SARS 质粒中含有的SARS 病毒S 蛋白基因的部分序列,分别在大肠杆菌BL21 和家蚕细胞以及家蚕幼虫体内进行表达。在大肠杆菌表达系统中首先将S 蛋白基因克隆到大肠杆菌表达载体pET28a（+）构建获重组大肠杆菌载体pET28a-S,将pET28a-S 在大肠杆菌BL21 中利用IPTG 进行诱导表达。在杆状病毒表达系统中将S 蛋白基因克隆到杆状病毒转移载体pBacPAK-His 中,构建重组杆状病毒转移载体pBacPAK-S,重组杆状病毒转移载体pBacPAK-S 与线性化杆状病毒BmBacPAK-6 共转染BmN 细胞,经筛选获得重组杆状病毒BmBac-S,并将其在细胞和家蚕中进行表达。表达产物经SDS-PAGE、Western Blotting 分析表明,大肠杆菌和家蚕中的表达产物的分子量分别为27 kDa 和30kDa 左右,重组病毒感染后的第5 天达到最高表达水平,约占血淋巴总蛋白的1.2%。另外利用金属螯合亲和层析纯化方法对BmN 细胞中的表达产物进行纯化,得到相对较纯的重组蛋白。
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